齐墩果酸聚合胶束的开发及其临床疗效评价

介绍

皮肤老化包括下垂（松弛）、变薄和皱纹。感染、吸烟、紫外线、创伤、荷尔蒙失衡、压力和/或促氧化剂（如水解酶（包括弹性蛋白酶或胶原酶））会加速它[1]。上述原因产生的活性氧或自由基会损害邻近细胞，导致皮肤弹性降低和变薄 [2, 3]。特别是，已知紫外线会触发活性氧的产生，从而破坏膜脂、细胞蛋白和 DNA，从而加速表情皱纹、雀斑和黄褐斑的发展 [1,2,3,4]。齐墩果酸是从多种植物中提取的天然植物来源的有效成分，用作主要的医药和化妆品成分。它还存在于苹果或梨等水果中 [5]。齐墩果酸作为一种羟基五环萜烯，最早从橄榄（Olea europaea ) 叶，广泛存在于植物中，包括东亚 swertia (Eugenia jambos ) 和黄龙胆 (Gentiana lutea ）。它不仅通过合成对胶原蛋白合成很重要的前胶原蛋白、神经酰胺和丝聚蛋白，还通过抑制 MMP-1（一种分解胶原蛋白等蛋白质的酶）的活性来促进抗衰老功能。 5, 6]。基于这些发现，可以假设齐墩果酸不仅通过促进胶原蛋白的生成，而且还可以防止胶原蛋白降解，从而具有双重抗衰老作用 [7]。因此，齐墩果酸是一种非常有前途的化妆品抗衰老成分。然而，齐墩果酸作为主要成分在化妆品中的应用受到其水溶性较差的限制；因此，只有少量齐墩果酸作为乳化制剂的一部分被用作化妆品的辅助成分 [8]。其与皮肤吸收相关的理化特性包括其熔点、分子量、分配系数和亲水性。它的熔点高于300 °C，表明它是一种高度结晶的材料。高度结晶的材料需要更大的溶解能量，由于其溶解度有限，生物利用度差，因此吸收性差[9]。此外，众所周知，高度亲水或亲油的化合物或高分子量的化合物不易渗透皮肤 [10, 11]。改善此类分子皮肤渗透最常用的方法是合成前体或使用胶体药物载体。在这方面，脂质体、乳液和聚合物胶束已得到积极研究[12]。

聚合物胶束是自组装的纳米级聚集体，在水溶液中形成核壳结构。聚合物胶束通常由二嵌段或三嵌段共聚物制成，可形成疏水内核和亲水外壳 [13, 14]。聚合物胶束被认为比表面活性剂胶束在物理上更稳定，因为聚合物胶束的性质取决于嵌段共聚物中聚合物单体的类型和比例，并且具有相对较低的临界胶束浓度[15, 16]。

在这项研究中，我们制备了齐墩果酸的聚合胶束，并评估了它们的粒径和形状，以及由此产生的齐墩果酸的包封效率和皮肤渗透率。还评估了这种形式的齐墩果酸的物理稳定性 3 个月。还研究了齐墩果酸在实际化妆品配方中的人体抗皱作用。

材料和方法

材料

齐墩果酸、吐温 80、吐温 20 和吐温 60 购自 TCI（日本东京）。 PEG 400、Pluronic F127 和 Pluronic F68 购自 BASF (Ludwigshafen, Germany)。丙二醇、PEG 300 和 PEG 200 购自 JUNSEI（日本东京）。 TRANSCUTOL P、LABRASOL、LAUROGLYCOL FCC、LABRAFAC、Capryol® 90 和 Capryol™ PGMC 购自 Gattefossé（法国里昂）。 EDTA二钠（Daejung Chemical &Metals Co., Ltd., Siheung, Korea）、尿囊素（Sigma Aldrich, St. Louis, MI, USA）、二丙二醇（Daejung Chemical &Metals Co., Ltd., Siheung, Korea）、丙二醇 (DuPont Tate &Lyle Bio Products Company, LLC, Loudon, USA)、卡波姆 (The Lubrizol Corporation, Ohio, USA) PEG/PPG/聚丁二醇-8/5/3 甘油（NOF Corporation，日本东京），钠透明质酸（TCI，东京，日本），β-葡聚糖（SK Bioland，Cheonan，韩国），苯氧乙醇（Daejung Chemical &Metals Co., Ltd.，Siheung，韩国），辛二醇（J TWO K BIO CO., Ltd. , Cheongju, Korea) 和乙基己基甘油 (J TWO K BIO CO., Ltd., Cheongju, Korea) 用于制备含有齐墩果酸的化妆品。 HPLC 级乙腈购自 Burdick &Jackson (Muskegon, MI, USA)。使用三重蒸馏水，其他溶剂和试剂均为EP和GR级。 Crlori：SKH1-hr无毛雌性小鼠购自OrientBio（韩国城南）。

HPLC 分析

使用 Shimadzu LC-30 系列 HPLC（Shimadzu Corporation，Kyoto，Japan）分析齐墩果酸。在环境温度下使用 Kromasil 100 C18 250 mm × 4.6 mm、5 μm 分析柱（Teknokroma，巴塞罗那，西班牙）。流动相为乙腈和水（85:15，v/v），流速为1 mL/min，进样量为10 μL。在紫外线 λ 下分析齐墩果酸 =210 nm。所有测量均在环境温度下进行[17]。

溶解度和配方优化研究

将测定量的齐墩果酸加入到增溶剂中，在 60 °C 下搅拌 48 小时，然后使用超声波清洗器超声处理 5 分钟。使用Universal 320R离心机（Hettich，Tuttlingen，Germany）以2000 rpm离心悬浮液，然后收集上清液。然后将上清液通过 0.45 μm PVDF 膜过滤器 (Whatman, Kent, UK) 过滤。齐墩果酸在相应增溶剂中的溶解度是通过从齐墩果酸和增溶剂的初始重量总和中减去剩余固体的重量来估算的（表 1）。

使用泊洛沙姆 188、泊洛沙姆 407、吐温 60 和吐温 80 进行配方优化研究。如表 2 中总结的，尝试了各种比例的两亲聚合物和表面活性剂。称重、加热和搅拌齐墩果酸和 Capryol® 90在超过 60 °C 直到观察到清澈的溶液。然后将表2中所示的聚合物/表面活性剂加入澄清溶液中并在60 ℃以上搅拌直至观察到澄清溶液。然后将溶液分散在蒸馏水中（图 1）。将所得溶液放置约 48 小时，然后进行目视检查以选择最佳配方。表2中每种配方的目视检查结果，包括对沉淀、相分离、透明度和凝胶化的观察，总结在表3中。

齐墩果酸胶束制备示意图

齐墩果酸聚合物胶束的制备

使用表 2 中的配方 G 和 H，使用图 1 所示的方法制备齐墩果酸 (PMO) 的聚合物胶束。 PMO-G 和 PMO-H 用于后续实验，PMO-H 用于化妆品中的 PMO-H临床试验。

染色测试

当制剂 G 或制剂 H 分散在水中时的聚合物胶束化通过目视观察，即透明度来确认。 PMO 的形成（PMO-G 或 PMO-H）也通过染色测试得到证实。在水与Capryol® 90、水、Capryol® 90、PMO-G、PMO-H的混合物中加入亚甲蓝，目视观察溶液颜色并拍照。

粒度测量

ELS（电泳光散射）技术测量粒子的散射强度波动作为时间的函数，当粒子在明确定义的电场中表现出随机布朗运动和定向电泳运动时。粒子电泳迁移率通过 ELS 技术 [18] 进行测量，并允许使用电泳光散射分光光度计（ELS-Z，Photal，Otsuka Electronics，日本）评估 PMO-G 和 PMO-H 的粒径。

扫描电子低温显微镜 (Cryo-SEM) 分析

低温扫描电子显微镜或扫描电子低温显微镜 (cryo-SEM) 是一种强大的技术，用于可视化胶体聚合物悬浮液或分散体在通过快速冷冻和断裂成像后的微观结构或纳米结构状态。断裂是在 - 196 °C，液氮的正常沸点和远低于散装和完全聚结颗粒的玻璃化转变温度下进行和检查的。冷冻 SEM 图像揭示了颗粒对通过冰传播穿过它们的裂缝的一系列响应 [19]。扫描电子低温显微镜（Tescan Mira 3 LMU FEG/Quorum Technologies PP3000T Cryo-SEM Sample Prepared System）用于观察PMO的形状。

封装效率

评价齐墩果酸聚合物胶束的包封效率。 PMO以2000 rpm离心15 min，收集上清液，HPLC分析。包封率计算为聚合物胶束中齐墩果酸的量除以 PMO 制备过程中最初加入的齐墩果酸量 (mg)。

PMO-H 的稳定性

通过在 40 °C 下储存 3 个月来评估 PMO-H 的物理稳定性。目视评估颜色变化、相分离、沉淀物的存在和浊度变化。通过 HPLC 分析定期采集的 PMO-H 样品以确定剩余齐墩果酸的量，并通过 ELS-Z 分析确定 PMO-H 粒径。结果如图9

体外皮肤渗透试验

使用 Franz 扩散池进行了一项体外皮肤渗透研究，以研究齐墩果酸对皮肤渗透的增强作用。对PMO-G、PMO-H、齐墩果酸和吐温80的混合物分散在蒸馏水中，以及齐墩果酸和丙二醇的混合物分散在蒸馏水中进行了测试。将一只 6 周龄雌性无毛小鼠的皮肤切成所需大小的块。使用垂直Franz细胞，将皮肤固定在两个腔室之间，角质层朝上。将 330 μl 选定的制剂涂在皮肤上，并用封口膜覆盖 Franz 细胞。受体以 9:1 (v/v) 的 PBS 溶液 (pH 7.4) 和乙醇填充。在每个采样时间用新鲜的 PBS 溶液重新填充受体溶液。在第 2、4、6、8、10、20 和 24 小时抽取样品并通过 HPLC 进行分析。 24 小时后，用Kimwipes（Kimberly-Clark Professional，NSW，Australia）去除残留在皮肤上的多余制剂。用于渗透研究的皮肤用 PBS 溶液清洁，残留在皮肤中的齐墩果酸通过 HPLC 测量。所有渗透实验一式三份进行。

研究统计

实验独立进行了 3 次重复，本研究的结果报告为平均值±标准差。统计分析由独立的t验证 测试，以及 p 的值 <0.05 被认为具有统计学意义。

使用 PMO-H 制备安瓿

对于临床试验，PMO-H用作试验产品。加入PMO-H、纯净水、EDTA二钠、尿囊素、二丙二醇、丙二醇、卡波姆、PEG/PPG/聚丁二醇-8/5/3甘油，磁力搅拌器搅拌10~15 min，再加入钾加入氢氧化物并将混合物进一步搅拌 5~10 分钟。待成分混合均匀后，加入透明质酸钠和β-葡聚糖，再搅拌2~5 min，然后加入苯氧乙醇、丙二醇、辛二醇和乙基己基甘油，搅拌2~5 min。将最终配方添加到安瓿中作为测试产品。在测试使用前使用真空干燥箱去除安瓿气泡。除排除齐墩果酸外，按与供试品相同的方法制备对照。

人类应用测试

人体皮肤刺激研究

对 25 名年龄在 22 至 56 岁不等且同意参加人体皮肤刺激试验的男性和女性受试者，对安瓿中含有 PMO-H 的化妆品进行皮肤斑贴试验。将每种测试物质滴在上臂上并用贴片固定。贴片贴附24 h，根据国际接触性皮炎研究组（ICDRG）的标准，在贴片去除后30 min、24 h和48 h由2名专业人员观察刺激程度。

改善皱纹的临床试验

将含有齐墩果酸作为最终产品形式的聚合物胶束应用于 23 名年龄从 30 至 65 岁不等的女性受试者的眼睛周围，这些受试者同意参加皱纹改善试验。受试者符合纳入标准，不符合排除标准，同意参加人体应用试验。研究人员和测试对象都遵循双盲方法。测试进行8 周，每4 周进行一次评估。采用双盲法和随机分配法。测试产品和对照分别随机应用于同一受试者的面部左侧或右侧。在 8 周内，每 4 周使用 Skin Visiometer SV 700（Courage + Khazaka electronic GmbH，Cologne，Germany）通过光学轮廓测量法评估五个参数 - 平均粗糙度 (R3) 是主要终点，皮肤粗糙度的四个参数 (R1) 、最大粗糙度 (R2)、平滑深度 (R4) 和算术平均粗糙度 (R5) 是次要终点。随时间测量受试者同一区域的五个参数的增加或减少，并计算五个参数的增加或减少的平均值并在对照和测试产品处理之间进行比较。此外，专业人士对皮肤进行了目视观察。使用 Janus 1 Mark II (PIE Co., Ltd., Suwon, Korea) 拍摄眼部皱纹的照片。用于确定视觉评估分数的标准如图 S1 所示，视觉结果如图 13 所示。使用配对样本对参数进行比较和分析t 以 95% [20,21,22,23,24,25] 的信度进行检验。

结果与讨论

增溶剂、表面活性剂和聚合物的测定

齐墩果酸在生物相容性增溶剂中的溶解度，特别是表面活性剂和聚合物，如表 1 所示。齐墩果酸倾向于溶于亲水亲油平衡 (HLB) 低的疏水油中。 Capryol® 90 的 HLB 值略高于一般油 [26]。然而，齐墩果酸在 Capryol® 90 中显示出相对较高的溶解度。此外，Capryol® 90 可以很容易地稳定作为胶束的内核 [27]。选择 Capryol® 90 后，针对齐墩果酸胶束的壳部分筛选了几种类型的表面活性剂或泊洛沙姆 [27,28,29,30]。表2所示的齐墩果酸胶束组合物是用蒸馏水稀释后立即透明的组合物。然而，一些组合物不稳定并在 24 h 内发生沉淀、相分离或凝胶化。沉淀、相分离、透明液体和凝胶状态的代表性图像如图 2 所示。每个配方的最终状态总结在表 3 中。即使在 24 小时后，组合物 G 和 H 仍保持透明。虽然我的成分保持清晰，但它是凝胶而不是液体。组合物A至D在24 小时后变得不透明并有沉淀。鉴于这些结果，选择组合物 G 和 H 进行进一步开发。

a的代表性图像 降水，b 相分离，c 透明液体，d 齐墩果酸胶束的凝胶化

齐墩果酸聚合物胶束的特性

通过染色试验研究了齐墩果酸聚合物胶束的结构。图 3 显示了 Capryol® 90 和蒸馏水、Capryol® 90、蒸馏水以及组合物 G (PMO-G) 和组合物 H (PMO-H) 的聚合物胶束的混合物在添加亚甲蓝后的图像解决方案。 Capryol® 90 和蒸馏水的混合物发生了明显的相分离。在 Capryol® 90 的情况下观察到亚甲蓝的沉淀。加入亚甲蓝后蒸馏水变成深蓝色。 PMO-G 和 PMO-H 也变成蓝色，表明聚合物胶束由油相内核和水相外壳组成。换言之，组合物 G 和 H 中的两亲性聚合物泊洛沙姆 407 作为外壳，通过包裹含有齐墩果酸的 Capryol® 90 的内核，帮助成功形成齐墩果酸的聚合胶束 [31]。

使用亚甲蓝染色测试：(a ) Capryol® 90 和蒸馏水的混合物，(b ) Capryol® 90, (c ) 蒸馏水, (d ) PMO-G, 和 (e ) PMO-H

粒径、粒径分布和形状可以作为预测胶束制剂物理稳定性的良好指标。 PMO-G的平均粒径为80.4 nm，PMO-H的平均粒径为57 nm（图4）。 PMO-A、G 和 H 的直方图如图 5 所示，以比较受相状态影响的尺寸分布。如表3所示，PMO-A因析出不透明，PMO-G和H为透明。 PMO-A的粒径大于100 nm，PMO-A的粒径分布比PMO-G和H更宽（图5）。 PMO-H的粒径分布比PMO-G窄，适合化妆品的流动性。

表2 PMO-G和PMO-H的平均粒径：80.4±11.1 nm（PMO-G）和57±5.24 nm（PMO-H）

三种不同 PMO 样品的粒子分析直方图。 一 PMO-A，121.28 nm； b PMO-G，80.4 nm；和 (c ) PMO-H, 57 nm

PMO-G和PMO-H的包封率为99%~100%，表明齐墩果酸几乎100%包封在PMO的内核中（图6）。

PMO-G和PMO-H的包封率显示几乎100%的药物包封率：98.26±0.17%（PMO-G）和99.18±1.06%（PMO-H）

PMO-G 和 PMO-H 的形状通过扫描电子低温显微镜 (Cryo-SEM) 进行研究。冷冻扫描电镜显示 PMO-G 和 PMO-H 均为球形聚合物胶束。然而，PMO-H聚合物胶束在尺寸和形状上比PMO-G聚合物胶束更一致（图7）。

a 的扫描电子低温显微图像 PMO-G 和 b PMO-H

PMO 的体外皮肤渗透研究

使用 6 周龄雌性无毛小鼠的皮肤测量残留在皮肤中的齐墩果酸总量以及作为时间函数渗透通过皮肤的齐墩果酸总量。四种不同的配方，PMO-G、PMO-H、齐墩果酸和吐温 80 的混合物分散在蒸馏水中 (OTw) 以及齐墩果酸和丙二醇的混合物分散在蒸馏水中 (OPG) 进行了皮肤方面的比较齐墩果酸的渗透效率。 24 h 后渗透通过皮肤的齐墩果酸总量为 PMO-H 29.49 ± 4.00%、PMO-G 21.39 ± 5.91%、OTw 13.66 ± 0.81% 和 OPG 5.90 ± 2.47%。如图 7 所示，在 PMO-G 和 PMO-H 的情况下第一次检测到齐墩果酸是在 8 h 时可能的，而在 OTw 中第一次检测到齐墩果酸是可能在 10 h 时，而 OPG 在 20 H。残留在皮肤中的齐墩果酸的比例对于 PMO-H 为 56.22 ± 13.50%，对于 PMO-G 为 36.74 ± 0.72%，对于 OTw 为 27.44 ± 7.02%，对于 OPG 为 26.28 ± 5.42%。 PMO-H 显示最大量的齐墩果酸透过皮肤和残留在皮肤中的齐墩果酸（图 8）。这些结果表明，与不形成胶束的制剂相比，PMO 可以更快、更多地渗透。

分散在蒸馏水 (Otw) 中的 PMO-G、PMO-H、齐墩果酸和吐温 80 混合物中齐墩果酸和分散在蒸馏水 (OPG) 中的齐墩果酸和丙二醇混合物中渗透穿过皮肤的齐墩果酸的总量每个配方中的酸作为时间的函数。 24 h 后皮肤中残留的齐墩果酸量：36.74 ± 0.72% (PMO-G)、56.22 ± 13.50% (PMO-H)、27.44 ± 7.02% (Otw) 和 26.28 ± 5.42% (OPG)。 24 h后渗透的齐墩果酸量：21.39±5.91%（PMO-G）、29.49±4.00%（PMO-H）、13.66±0.81%（Otw）和5.90±2.67%（OPG）

液体齐墩果酸聚合物胶束的稳定性

在表征和体外渗透研究的基础上，最终选择 PMO-H 进行安瓿制备。在制备安瓿之前，评估了 ONM-H 的稳定性。对于稳定性研究，PMO-H 在加速稳定性研究条件下在 40 °C/75% RH 下储存在小瓶中 3 个月。然后目视评估沉淀、相分离、颜色变化和透明度。然后使用 HPLC 测量齐墩果酸的比例，并检查粒度的变化。随着时间的推移检查稳定性。 PMO-H保持透明，无沉淀或相分离，在加速稳定条件下3 个月颜色不变。 HPLC测得齐墩果酸的比例和粒径随时间的变化见图9。齐墩果酸的比例保持在98%以上，49.6±5 nm的粒径在稳定的3 个月期间几乎保持不变学习时段。这些结果表明PMO-H在加速稳定条件下的物理和化学稳定性达3 个月。

在40 °C/75% RH加速条件下3 个月稳定性试验中PMO-H的含量和粒径变化。 PMO-H 中齐墩果酸的比例：100±1.6%（0 月）、99.9±0.2%（1 月）、99.5±0.2%（2 月）和 99.3±0.2%（3 月）。 PMO-H的粒径：55.3±6.5 nm（0 月）、54.6±7 nm（1 月）、51.0±5.56 nm（2 月）和49.6±5 nm（3 月）

临床试验

人体刺激测试

临床试验前，对25名22~56 岁的健康女性和男性志愿者进行了人体刺激试验。将供试品贴于受试者上臂24 h，取贴后30 min、24 h、48 h测定皮肤刺激指数。含有PMO-H的化妆品安瓿配方在贴片去除后1 h或48 h未观察到刺激。

临床试验

临床试验对23名女性受试者进行，年龄30~65 岁，眼部有皱纹；除 3 名退出者外，20 名受试者通过分别将测试产品、PMO-H 安瓿和对照组分别应用于面部左侧或右侧 8 周来完成试验。根据五个参数评估皮肤变化——平均粗糙度 (R3) 作为主要终点，另外四个参数作为次要终点，即皮肤粗糙度 (R1)、最大粗糙度 (R2)、光滑深度 (R4) 和算术平均粗糙度(R5)。视觉评估分数增加了另一个次要终点。结果总结在表4中。

主要终点 R3 在使用测试产品 4 周后降低了 0.673%，在使用 8 周后显着降低了 7.835% (p =0.006）。使用对照应用后，R3 在使用 4 周后增加了 5.127%，在使用 8 周后显着增加了 9.971% (p =0.010）。使用8 周后，受试产品处理的区域与对照处理的区域之间R3值的差异具有统计学意义（p =0.000) but not statistically significant after 4 weeks of use, perhaps due to inter-subject variation (Fig. 10).

Changes in primary endpoint value, R3, before, after 4 weeks use, and after 8 weeks use of an ampoule containing polymeric micelles of oleanolic acid and the control during clinical trial. R3 value of test product use:0.094 ± 0.023 before use, 0.093 ± 0.023 after 4 weeks use, 0.086 ± 0.020 after 8 weeks use. R3 value of control product:0.087 ± 0.023 before use, 0.091 ± 0.025 after 4 weeks use, 0.095 ± 0.024 after 8 weeks use (A.U. for arbitrary unit). * ¹ The wrinkle analysis of R3 value decreased statistically significantly. * ² The wrinkle analysis of R3 value increased statistically significantly

The analysis of the secondary endpoint R1 showed that the value had decreased by 4.629% after 4 weeks of test product use and statistically significantly by 9.973% after 8 weeks of use (p =0.017）。 With control application, R1 had increased by 8.037% after 4 weeks of use and 4.799% after 8 weeks of use. The difference in R1 values between the areas using the test product and the control was not statistically significant after 4 weeks of use but was after 8 weeks of use (p =0.024）。 The secondary endpoint R2 had decreased by 1.048% after 4 weeks of test product use and 5.803% after 8 weeks. With control application, it had increased by 7.261% after 4 weeks and 9.536% after 8 weeks. The difference in R2 value between the areas treated by the test product and those treated by the control was statistically significant after 8 weeks of use (p =0.016) but not after 4 weeks of use. The secondary endpoint R4 had significantly decreased by 8.594% (p =0.039) after 4 weeks of test product use and by 9.747% after 8 weeks of use. With the control, R4 had increased by 10.764% after 4 weeks of use and 3.491% after 8 weeks of use. Interestingly, the difference in R4 value between the areas using the test product and the control was statistically significant after 4 weeks of use (p =0.008) but not after 8 weeks. The secondary endpoint R5 had decreased by 6.333% after 4 weeks of test product use and 8.556% after 8 weeks of use. The difference in R5 value between the areas of using the test product and the control was not statistically significant following 4 weeks or even 8 weeks of use.

The analysis of the further secondary endpoint, the visual evaluation of wrinkles, showed that the visual evaluation score had decreased by 2.917% after 4 weeks of test product use and statistically significantly decreased by 8.333% after 8 weeks of use (p =0.034). With application of the control, the visual evaluation score had increased by 1.667% after 4 weeks and 4.167% after 8 weeks. The difference of the visual evaluation score between the areas treated by the test product and by the control was statistically significant after 8 weeks of use (p =0.046) but not after 4.

In summary, the analysis of the wrinkled area around the eyes showed that the difference in the primary endpoint value R3 between the areas treated by the test product and by the control was statistically significant after 8 weeks of use. In terms of the secondary endpoints, all values had decreased after test product use and increased after control use. The difference in R4 values between the areas treated by the test product and those treated by the control was statistically significant after 4 weeks of use, but the difference of the R1 and R2 values were statistically significant only after 8 weeks of use (Fig. 11). The visual evaluation score by professionals showed that all the average visual evaluation scores for wrinkles had decreased after 4 weeks and 8 weeks of test product treatment compared to the control (Table 5). The difference in the visual evaluation score between the areas treated by the test product and by the control was statistically significant after 8 weeks of use (Fig. 12). Overall, according to all endpoints, the cosmetics formula containing PMO-H as a primary ingredient was found to help improve wrinkles after 8 weeks of use (Fig. 13).

Results of secondary endpoint R1, R2, R4, and R5 for skin wrinkle measurement—before use, after 4 weeks use, and after 8 weeks use of the test product and the control. Please refer to Table 4 for the exact values (A.U. for arbitrary unit)

Results of visual evaluation of skin—before use, after 4 weeks use, and after 8 weeks use of the test product and the control. Test product:3.050 ± 0.887 before use, 2.95 ± 0.999 after 4 weeks use, and 2.75 ± 0.851 after 8 weeks. Control product:2.900 ± 0.887 before use, 2.95 ± 0.945 after 4 weeks use, and 3.000 ± 0.918 after 8 weeks use. * ¹ The visual evaluation grade of wrinkles by professionals decreased significantly. * ² The visual evaluation grade of wrinkles by professionals increased significantly

Pictures of the tested areas

Conclusions

Surfactants are commonly used excipients in cosmetic products to improve solubility of poorly soluble materials. One caveat would be the amount included in the product. Surfactants should be added in sufficient amount to dissolve poorly soluble materials without precipitation. Only a minimal amount should be added for safety reasons. Micelle formulation could be the solution to this problem. Polymeric micelles of oleanolic acid developed in this study improve the solubility of oleanolic acid with a minimum amount of surfactants and enhance the permeation of oleanolic acid through the skin. Stable polymeric micelles of oleanolic acid were developed using Capryol 90 and poloxamer. The polymeric micelles of oleanolic acid developed in this study were stable, that is, they did not show any precipitation, phase separation, or degradation at 40 °C after 3 months. The clinical trial showed that, as a main active ingredient, the oleanolic acid in the polymeric micelle formulation is effective for alleviating human wrinkles. Based on these findings, it can be concluded that oleanolic acid, which is poorly soluble in water and therefore, unusable in a native form as a principal ingredient for alleviating skin wrinkles, can be formulated into applicable polymeric micelles. Furthermore, it is expected that the polymeric micelles of oleanolic acid developed in this study will prove very useful for alleviating human wrinkles and will prove widely applicable to cosmetic applications.

数据和材料的可用性

Not applicable

缩写

PMO:

Polymeric micelles of oleanolic acid

PEG：

聚乙二醇

TRANSCUTOL P:

Highly purified diethylene glycol monoethyl ether

LABRASOL:

PEG-8 Caprylic/Capric Glycerides

LAUROGLYCOL FCC:

Propylene glycol monolaurate (type I, monoesters>45%)

LABRAFAC:

Caprylic/Capric Triglyceride

Capryol® 90:

Propylene glycol monocaprylate (type II, monoesters>90%)

Capryol™ PGMC:

Propylene glycol monocaprylate (type I, monoesters>55%)

EDTA：

Ethylenediaminetetraacetic Acid

ELS:

Electrophoretic light scattering