人脐带间充质干细胞外泌体miR-18b-3p靶向瘦素降低子痫前期风险

摘要

人脐带间充质干细胞（hucMSCs）分泌的外泌体携带微小RNA在人类疾病中备受关注。然而，hucMSCs来源外泌体miR-18b-3p对子痫前期（PE）的详细分子机制仍需深入探究。本研究旨在探讨外泌体及miR-18b-3p/瘦素（LEP）轴对PE发生的影响。鉴定了hucMSCs和hucMSCs外泌体（Exos）的形态。用表达不同miR-18b-3p的慢病毒感染外泌体，探究miR-18b-3p在PE中的作用。腹腔注射N-硝基-L-精氨酸甲酯建立PE大鼠模型。检测PE大鼠胎盘组织中LEP和miR-18b-3p表达，以及外泌体对其表达的影响。检测PE大鼠收缩压（SBP）、蛋白尿、炎症因子、胎鼠和胎盘重量及细胞凋亡。最后通过双荧光素酶报告基因实验和RNA pull-down实验验证miR-18b-3p与LEP的关系。结果显示，外泌体、恢复miR-18b-3p或抑制LEP均可降低PE大鼠SBP和蛋白尿，增加胎鼠和胎盘重量，降低血清炎症因子水平，抑制细胞凋亡，抑制PE进程。PE大鼠胎盘中miR-18b-3p下调、LEP上调。LEP是miR-18b-3p直接靶基因。上调miR-18b-3p或外泌体处理抑制LEP表达、减少PE发生，而下调miR-18b-3p效果相反。LEP下调逆转了miR-18b-3p减少对PE大鼠的影响。hucMSCs来源外泌体miR-18b-3p靶向LEP参与PE发生发展。本研究为PE机制研究提供新理论依据。

引言

子痫前期（PE）以蛋白尿和高血压为特征，是导致人类妊娠期胎儿和孕产妇死亡率及发病率的主要原因。PE的病因和发病机制尚不清楚，据报道与异常滋养层侵袭导致母体内皮功能障碍、慢性胎盘灌注不足及不良结局相关的高血压有关。除胎儿和胎盘娩出外，PE无特效疗法。因此，迫切需要探索治疗靶点以改善预后。

人脐带（huc）是间充质干细胞（MSCs）的优质来源，其分泌多种营养因子和细胞因子，具有强抗炎和免疫调节能力。研究证实PE加速脐带华通胶来源MSCs的神经胶质标志物表达。hucMSCs外泌体（Exos）对PE大鼠胎盘形态和血管生成的保护作用也已报道。外泌体是小分泌囊泡（50–100 nm），通过包裹和传递致癌因子到远端或周围细胞，介导肿瘤微环境中细胞间通讯。研究揭示外泌体有效转运sFlt-1和sEng入内皮细胞导致PE患者血管功能受损和并发症。微小RNA（miRNAs）是长度18–25核苷酸的内源性非编码RNA，在转录后水平调控基因表达。研究报道miR-18b表达影响PE中滋养层细胞侵袭、活力和迁移。Wu等提出miR-18b减弱高糖诱导的人视网膜内皮细胞增殖，为理解糖尿病视网膜病变发病机制提供新见解。然而，hucMSCs来源外泌体miR-18b-3p在PE中的作用尚不清楚。瘦素（LEP）对细胞分化/增殖和生理状态免疫有多效性，主要源自脂肪细胞，也包括胎盘等其他组织。研究证实异常LEP启动子甲基化参与PE进程。另一研究提示胎盘是妊娠期LEP表达主要部位。但miR-18b-3p与LEP的结合关系仍不明确。因此，本研究旨在探讨hucMSCs来源外泌体miR-18b-3p在PE中的作用及LEP的参与，推测hucMSCs外泌体miR-18b-3p可能通过靶向LEP抑制PE进展。

材料与方法

伦理批准

本研究经武汉大学人民医院机构审查委员会批准。所有参与者签署知情同意书。所有动物实验符合武汉大学人民医院国际委员会《实验动物护理和使用指南》。

hucMSCs的分离、培养和鉴定

收集健康产妇分娩的胎儿脐带，剪碎、筛网过滤，混合磷酸盐缓冲液（PBS）。脐带组织以1500 r/min离心5 min（离心半径10 cm）。悬浮组织于含10%胎牛血清（FBS）的DMEM/F12培养基中，接种培养瓶。4天后换液，此后每3天换液一次。细胞融合度约90%时传代。倒置显微镜观察hucMSCs贴壁生长形态。油红O染色（贝时生物，上海）检测成骨分化，碱性磷酸酶（ALP）染色（贝时）检测成脂分化。流式细胞仪（贝克曼库尔特，美国）检测CD73、CD166（均1:10，BD Biosciences，美国）和CD105（1:20，AbD Serotec，英国）。

hucMSCs-Exos的提取和鉴定

良好生长的hucMSCs继续培养。收集上清，28,500 r/min超速离心1 h（离心半径10 cm）。弃上清，细胞用2%戊二醛和1%四氧化锇固定，乙醇脱水、丙酮酸浸泡、干燥2 h、Epon812包埋切片。切片分别用铀和铅染色，透射电镜观察外泌体。纳米粒子追踪分析仪（Malvern，英国）检测外泌体纳米颗粒布朗运动成像及粒径。Western blot检测hucMSCs-Exos表面标志物，结果显示表达CD9、CD81、CD63。

慢病毒感染方法

hucMSCs感染含低表达miR-18b-3p载体及其阴性对照（NC）的慢病毒（上海基因化学公司）。最终获得稳定表达的hucMSC-antagomir NC和hucMSC-miR-18b-3p antagomir。培养48 h，收集上清超速离心获得对应Exos-antagomir NC和Exos-miR-18b-3p antagomir。

实验动物

选用健康洁净级、性成熟的Wistar大鼠（体重200–250 g，龄8周，不限雌雄）（武汉大学实验动物中心，中国武汉）。大鼠饲养在屏障系统中，温度18–28 °C，相对湿度40–70%，充足饮食饮水。

大鼠PE模型建立

参考文献[17]，腹腔注射50 mg/kg一氧化氮合酶抑制剂N(G)-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME，贝时）建立大鼠PE模型。模型建立成功标准：收缩压升高≥20 mmHg且>115 mmHg，蛋白尿增强。

动物分组

雌雄大鼠1:1随机同笼，前一天17–18时放入专用笼。次日阴道栓和显微镜观察阴道分泌物精子，阳性同时记为妊娠第0天。从妊娠第13天起分6组（每组10只）：正常组（妊娠第13–20天腹腔注射等量生理盐水），PE组（妊娠第13–20天腹腔注射L-NAME [50 mg/kg/天]，妊娠第16–19天胎盘注射20 μL生理盐水），PE+miR-NC组（同PE组，胎盘注射20 μL 4 nmol miR-NC），PE+miR-18b-3p agomir组（同PE组，胎盘注射20 μL 4 nmol miR-18b-3p agomir），PE+miR-18b-3p antagomir组（同PE组，胎盘注射20 μL 4 nmol miR-18b-3p antagomir），PE+miR-18b-3p antagomir+si-LEP组（同PE组，胎盘注射20 μL 4 nmol miR-18b-3p antagomir和si-LEP），PE+si-LEP组（同PE组，胎盘注射20 μL 4 nmol si-LEP）。

另设外泌体处理组，分5组（每组10只）：正常组（同前），PE组（同前），PE+Exos组（同PE组，胎盘注射20 μL Exos [80 μg外泌体悬浮于20 μL生理盐水]），PE+Exos-antagomir NC组（同PE组，胎盘注射20 μL Exos-antagomir NC [80 μg外泌体悬浮于20 μL生理盐水]），PE+Exos-miR-18b-3p antagomir组（同PE组，胎盘注射20 μL Exos-miR-18b-3p antagomir [80 μg外泌体悬浮于20 μL生理盐水]）。

收缩压（SBP）检测与24 h蛋白尿测定

大鼠尾动脉血压法测压。妊娠第10、13、16、19天用大鼠尾动脉压力检测仪（Tensys Medical Inc.，美国）测量尾袖带SBP，短时间内测3次取平均值。

自由饮食饮水条件下，妊娠第10、13、16、19天收集24 h尿液，武汉大学人民医院肾内科检测蛋白含量。

样本采集

妊娠第21天用3%戊巴比钠麻醉孕鼠。保留外周血，离心取血清，-20 °C备用。剖宫产取出胎鼠和胎盘，去除胎膜和脐带，剪断连接胎鼠的脐带。胎盘和胎鼠置于无菌纱布吸干血液和羊水，分别称重。部分胎盘组织4%多聚甲醛固定、乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋、连续横向切片（5 μm）作HE染色和TUNEL染色。其余-80 °C保存供RT-qPCR、Western blot和ELISA检测。

ELISA检测

按试剂盒说明（R&D Systems，美国）检测血清肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白细胞介素 (IL)-1β、IL-6含量。酶标仪（Thermo Fisher，美国）读取490 nm光密度（OD）值。以OD值为横坐标、标准品浓度为纵坐标绘制标准曲线，计算TNF-α、IL-1β、IL-6浓度。

HE染色

胎盘石蜡切片二甲苯透明、梯度酒精水化、苏木精染色、1%盐酸酒精分化、1%氨水复蓝。1%伊红复染、脱水（75%、90%、95%乙醇、无水乙醇）、二甲苯透明、干燥封片、电镜观察。

TUNEL染色

石蜡切片常规脱蜡水化，按说明用TUNEL试剂盒（南京科进生物技术公司，江苏）检测凋亡。4,6-二氨基-2-苯基吲哚（上海百泰生物，上海）荧光显微镜（尼康，日本）观察TUNEL阳性细胞。

RT-qPCR

胎盘组织称重，每50–100 mg加1 mL TRIzol（Invitrogen，美国）完全溶解。加200 μL氯仿，4 °C、12,000 rpm离心提取总RNA。DU-800蛋白核酸分光光度计（贝克曼）测定RNA浓度纯度。U6和β-actin作内参。PCR引物由上海桑杰生物公司设计合成（见表1）。按RNA逆转录盒说明（桑杰）逆转录成cDNA。PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳验证产物。用2⁻ΔΔCt法计算数据。

Western Blot分析

胎盘组织总蛋白用RIPA裂解液（贝时）提取。hucMSCs-Exos用提取缓冲液，14,000 rpm离心取上清检测外泌体标志蛋白（CD81、CD63、CD9）血清表达。BCA试剂盒（贝时，P0010）测定蛋白浓度。按定量结果上样，10% SDS-PAGE电泳转膜。5%脱脂奶粉封闭，一抗孵育：LEP、CD63、CD81、CD9、β-actin（4 mL，1:1000，Santa Cruz，美国），二抗孵育，显色显影。β-actin作内参。Image Lab软件分析灰度值。

双荧光素酶报告基因实验

在线预测软件（https://cm.jefferson.edu/）预测miR-18b-3p与LEP靶向关系及miR-18b-3p与LEP 3'非翻译区（UTR）结合位点。构建含miR-18b-3p结合位点的LEP 3'UTR启动子区序列。构建LEP 3'UTR野生型（WT）质粒和LEP 3'UTR突变型（MUT）质粒，分别命名为LEP 3'UTR-WT和LEP 3'UTR-MUT。293T细胞共转染：miR-18b-3p mimic+LEP 3'UTR-WT，miR-18b-3p mimic+LEP 3'UTR-MUT，mimic NC+LEP 3'UTR-WT，mimic NC+LEP 3'UTR-MUT，30 h后收集细胞。按双荧光素酶报告基因检测盒（Promega，美国）用GloMax 20/20发光仪测定萤火虫和海肾荧光素酶活性。

RNA Pull-down实验

生物素标记RNA探针（Bio-miR-NC、Bio-miR-18b-3p、Bio-miR-18b-3p-Mut）与293T细胞裂解液孵育，磁珠结合抗生素链霉亲和素提取。按Pierce磁性RNA pull-down试剂盒（Pierce，美国）说明操作。TRIzol（Pierce）洗脱纯化RNA。按前述RT-qPCR法定量RNA复合物中LEP富集度。

统计分析

SPSS 21.0（IBM，美国）分析数据。计量资料以均数±标准差表示。两组比较用独立样本t检验，多组比较用单因素方差分析（ANOVA）后接Tukey事后检验。统计学显著性标准设为p<0.05。

结果

hucMSCs和hucMSCs-Exos的形态与鉴定

倒置显微镜观察脐带组织块：第3天可见细胞从组织块爬出；约5天呈纺锤状、丝状、克隆生长。传代至第3代时，细胞形态均一长梭形，类似成纤维细胞，排列规则（图1a）。脂肪成化诱导2周后，细胞质形成脂滴，倒置镜下呈花环结构（图1b），提示分离培养的hucMSCs具成脂分化能力。成骨诱导2周后，倒置镜下可见大量棕色钙结节（图1c），提示具成骨分化能力。流式细胞仪检测免疫表型，结果显示细胞高表达MSCs表面标志物CD73、CD105、CD166（图1d）。

hucMSCs和hucMSCs-Exos形态鉴定。(a) 倒置镜下hucMSCs形态；(b) 油红O染色；(c) ALP染色；(d) 流式检测免疫表型；(e) TEM观察hucMSCs-Exos形状大小；(f) 纳米粒子追踪分析外泌体粒径分布；(g) Western blot检测hucMSCs-Exos中CD9、CD81、CD63蛋白表达

透射电镜观察hucMSCs-Exos形态：外泌体呈圆形或椭圆形，中央低密度、两侧染色深（图1e）。纳米粒子追踪分析粒径：主要分布在40–100 nm，峰值约80 nm（图1f）。Western blot显示hucMSCs-Exos表达表面标志物CD81、CD63、CD9（图1g）。

恢复miR-18b-3p改善PE大鼠病理特征

SBP和24 h蛋白尿结果：给药前（妊娠第10天）6组SBP和蛋白尿无显著差异。妊娠第19天正常组SBP和蛋白尿无明显差异。PE组及PE+miR-NC、miR-18b-3p agomir、miR-18b-3p antagomir、miR-18b-3p antagomir+si-LEP、si-NC、si-LEP组，SBP和蛋白尿自妊娠第13天起升高。PE+miR-18b-3p agomir组和si-LEP组妊娠第16、19天SBP和蛋白尿无显著差异。PE组妊娠第19天SBP和蛋白尿升高；miR-18b-3p上调减弱此升高，miR-18b-3p抑制进一步增强；LEP下调消除了miR-18b-3p下调对妊娠第19天SBP和蛋白尿的影响（图2a,b）。

恢复miR-18b-3p改善PE大鼠病理特征。(a) 大鼠SBP结果；(b) 24 h蛋白尿结果；(c) 胎鼠体重变化；(d) 胎盘重量变化；(e) ELISA检测血清炎症因子变化。n=10，*P<0.05 vs 正常组；^P<0.05 vs PE+miR-NC组；@P<0.05 vs PE+miR-18b-3p antagomir组；&P<0.05 vs PE+si-NC组。数据为均数±标准差，多组比较用单因素ANOVA后接Tukey检验

PE大鼠胎鼠和胎盘体重减轻；上调miR-18b-3p或下调LEP可增加体重，下调miR-18b-3p减轻体重；LEP沉默逆转了miR-18b-3p抑制对胎鼠和胎盘体重的影响（图2c,d）。

ELISA检测血清炎症因子：PE大鼠TNF-α、IL-1β、IL-6升高；miR-18b-3p上调或LEP抑制可降低，miR-18b-3p下调可升高；LEP耗竭消除了miR-18b-3p抑制对TNF-α、IL-1β、IL-6的影响（图2e）。

miR-18b-3p过表达改善PE大鼠胎盘组织病理改变

正常组胎盘绒毛血管丰富、结构清晰，合体滋养层为主，细胞滋养层较少。PE组及PE+miR-NC、miR-18b-3p antagomir、si-NC、miR-18b-3p antagomir+si-LEP组：胎盘绒毛减少、结构模糊萎缩、部分绒毛纤维素样坏死、合体滋养层结节增多、多数绒毛不成熟。PE+miR-18b-3p agomir组和si-LEP组营养细胞减少、病理改变减轻（图3a）。

miR-18b-3p过表达改善胎盘病理并抑制凋亡。(a) HE染色胎盘病理特征；(b) TUNEL染色胎盘凋亡细胞；(c) TUNEL检测细胞凋亡率。n=10，*P<0.05 vs 正常组；^P<0.05 vs miR-NC组；@P<0.05 vs miR-18b-3p antagomir组；&P<0.05 vs si-NC组。数据为均数±标准差，多组比较用单因素ANOVA后接Tukey检验

TUNEL染色显示正常组少量凋亡细胞。PE大鼠凋亡细胞增加，miR-18b-3p上调和LEP沉默可减少，miR-18b-3p抑制进一步增强；LEP沉默也逆转了miR-18b-3p抑制对PE大鼠凋亡细胞数的影响（图3b,c）。

综上，上调miR-18b-3p或抑制LEP的大鼠在组织学上PE进展程度降低，LEP沉默可消除miR-18b-3p抑制的治疗效果。

PE大鼠胎盘组织中miR-18b-3p下调、LEP上调及miR-18b-3p靶向LEP

基于上述LEP下调逆转miR-18b-3p下调治疗效果的结果，推测miR-18b-3p可能与LEP相关。

Western blot和RT-qPCR显示：PE大鼠miR-18b-3p下调、LEP上调；miR-18b-3p agomir处理上调miR-18b-3p、下调LEP；miR-18b-3p antagomir处理上调LEP；LEP沉默逆转了miR-18b-3p减少对LEP表达的促进作用（图4a–c）。

PE大鼠胎盘中miR-18b-3p下调、LEP上调及靶向关系。(a) RT-qPCR检测胎盘miR-18b-3p和LEP mRNA表达；(b) 胎盘LEP蛋白条带；(c) Western blot检测胎盘LEP蛋白表达；(d) 外泌体处理后胎盘miR-18b-3p和LEP mRNA表达（RT-qPCR）；(e) 外泌体处理后胎盘LEP蛋白条带；(f) 外泌体处理后胎盘LEP蛋白表达（Western blot）；(g) 在线软件预测miR-18b-3p与LEP结合位点；(h) 双荧光素酶报告基因实验验证靶向关系；(i) RNA pull-down实验验证靶向关系。n=10，*P<0.05 vs 正常组；^P<0.05 vs miR-NC组；@P<0.05 vs miR-18b-3p antagomir组；&P<0.05 vs si-NC组；#P<0.05 vs PE组；$P<0.05 vs PE+Exos-antagomir NC组。数据为均数±标准差，多组比较用单因素ANOVA后接Tukey检验

Western blot和RT-qPCR探讨外泌体在PE大鼠中的作用。结果显示：外泌体上调miR-18b-3p、下调LEP，提示外泌体抑制PE发展。携带miR-18b-3p antagomir的外泌体导致PE大鼠miR-18b-3p下调、LEP上调（图4d–f）。

生物信息学在线预测软件（https://cm.jefferson.edu/）预测miR-18b-3p与LEP靶向关系及结合位点（图4g）。双荧光素酶报告基因实验显示：miR-18b-3p mimic降低LEP 3'UTR-WT荧光素酶活性，对LEP 3'UTR-MUT无影响（图4h）。RNA pull-down实验显示：WT-生物素标记miR-18b-3p富集LEP（图4i）。以上结果表明LEP是miR-18b-3p的靶基因。

hucMSCs-Exos减轻PE大鼠病理特征

SBP和24 h蛋白尿结果：给药前（妊娠第10天）5组无显著差异。妊娠第19天正常组无显著差异。PE组SBP和蛋白尿自妊娠第13天起升高。PE+hucMSCs-Exos组和PE+hucMSCs-Exos-antagomir NC组妊娠第16、19天SBP和蛋白尿无显著差异。PE组妊娠第19天SBP和蛋白尿升高，hucMSCs-Exos注射减弱升高；抑制miR-18b-3p逆转了hucMSCs-Exos对妊娠第19天SBP和蛋白尿的影响（图5a,b）。

hucMSCs-Exos减轻PE大鼠病理特征。(a) 外泌体处理后大鼠SBP；(b) 24 h蛋白尿；(c) 胎鼠体重变化；(d) 胎盘重量变化；(e) ELISA检测血清炎症因子变化。n=10，*P<0.05 vs 正常组；#P<0.05 vs PE组；$P<0.05 vs PE+Exos-antagomir NC组。数据为均数±标准差，多组比较用单因素ANOVA后接Tukey检验

胎鼠和胎盘体重：PE组减轻；miR-18b-3p下调消除了hucMSCs-Exos对胎鼠和胎盘体重的作用（图5c,d）。

ELISA检测血清炎症因子：PE组TNF-α、IL-1β、IL-6显著升高。外泌体处理降低PE大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6，注射抑制miR-18b-3p的外泌体则升高（图5e）。

外泌体改善PE大鼠胎盘组织病理改变并抑制凋亡

正常组胎盘绒毛血管丰富、结构清晰，合体滋养层为主，细胞滋养层较少。PE组及PE+hucMSCs-Exos-miR-18b-3p antagomir组：胎盘绒毛减少、结构模糊萎缩、部分纤维素样坏死、合体滋养层结节增多、多数绒毛不成熟。PE+hucMSCs-Exos组和PE+hucMSCs-Exos-antagomir NC组病理改变较PE组及PE+hucMSCs-Exos-miR-18b-3p antagomir组改善（图6a）。

外泌体改善胎盘病理并减少凋亡。(a) 外泌体处理后PE大鼠胎盘HE染色；(b) TUNEL染色凋亡细胞；(c) TUNEL检测细胞凋亡率。n=10，*P<0.05 vs 正常组；#P<0.05 vs PE组；$P<0.05 vs PE+Exos-antagomir NC组。数据为均数±标准差，多组比较用单因素ANOVA后接Tukey检验

TUNEL染色显示正常组少量凋亡细胞。PE大鼠凋亡细胞增多，miR-18b-3p下调逆转了hucMSCs-Exos对PE大鼠胎盘组织凋亡细胞数的影响（图6b,c）。

讨论

PE是以蛋白尿和高血压或其他不良状况为特征的多系统妊娠疾病，与广泛的母体内皮功能障碍相关。有报道hucMSCs-Exo通过抑制细胞凋亡、促进胎盘血管生成，以剂量依赖方式改善PE大鼠胎盘形态。研究报道miR-18b表达影响PE中细胞迁移、活力和侵袭。另有研究证实早发PE中母体LEP浓度升高、胎盘LEP低甲基化。本研究旨在探讨外泌体及miR-18b-3p靶向LEP对PE发生的影响。研究发现hucMSCs来源外泌体miR-18b-3p通过降低LEP抑制PE进展。

本研究发现PE大鼠胎盘中miR-18b-3p降低、LEP升高。与本研究一致，PE胎盘组织miR-18b mRNA表达显著低于正常胎盘。此外，恶性黑色素瘤组织miR-18b含量显著低于匹配的邻近非肿瘤组织。另一研究证实早产PE胎盘LEP表达高于对照。研究显示子痫前期胎盘LEP表达明显升高。这些文献为探讨PE中miR-18b-3p和LEP异常表达提供理论基础。此外，生物信息学软件预测LEP被miR-18b-3p靶向，本研究双荧光素酶报告基因实验进一步确证。有研究报道早发PE中LEP是miR-1301、miR-223、miR-224三种miRNA的共同靶点。另一研究显示LEP在骨关节炎和类风湿关节炎中下调miR-93表达。然而，miR-18b-3p与LEP在人类疾病（特别是PE）中的结合关系研究甚少，这是本研究的创新点。此外，本研究发现外泌体上调miR-18b-3p、下调LEP。前有研究报道结直肠癌血浆外泌体中miR-18b-5p显著升高，而hucMSCs-Exos与miR-18b-3p/LEP在PE中的关系仍需进一步研究。

本研究发现恢复miR-18b-3p降低PE大鼠SBP和24 h蛋白尿，增加胎盘重量，降低血清和胎盘组织TNF-α、IL-1β、IL-6，抑制细胞凋亡。这些数据表明miR-18b-3p上调有助于缓解PE症状和病理改变。有研究证实稳定上调miR-18b产生有效抑瘤活性，如抑制黑色素瘤细胞活力、诱导凋亡、体内抑制肿瘤生长。本研究另一发现：hucMSCs-Exos降低PE大鼠SBP和24 h蛋白尿，增加胎盘重量，降低血清和胎盘组织TNF-α、IL-1β、IL-6，抑制细胞凋亡。现有研究显示外泌体处理PE大鼠模型可增加胎仔数量和质量、胎盘质量，显著减少细胞凋亡。有趣的是，前人研究显示胎牛外泌体降低巨噬细胞TNF-α和IL-6。研究证实纯化外泌体抑制脂多糖/尼日菌素刺激的巨噬细胞IL-1β产生。Nong等提示人诱导多能干细胞来源MSCs产生的外泌体给药后显著降低TNF-α、IL-6等炎症标志物。有文章发现后来发展为PE的女性组SBP显著升高。PE患者SBP、舒张压和蛋白尿呈正相关。近期研究证实PE女性蛋白尿随孕周推进升高。重要发现：PE组大鼠TNF-α高于正常妊娠组。另一研究证实PE女性血清IL-6和IL-1β显著高于对照。上述发现提示PE患者通常表现为高SBP、蛋白尿和炎症因子水平。因此可推断hucMSCs来源外泌体miR-18b-3p对PE有治疗作用。

结论

总之，本研究证实hucMSCs来源外泌体上调miR-18b-3p，靶向LEP抑制PE大鼠胎盘组织炎症因子含量和细胞凋亡率，从而抑制PE发生。因此，外泌体miR-18b-3p可能通过靶向LEP成为治疗PE的潜在候选分子。本研究首次阐明了hucMSCs来源外泌体miR-18b-3p靶向LEP在PE发展中的作用，为PE治疗提供新见解。但受已知研究限制，未来临床试验仍需严格监测和规范报告。