加载多柔比星的 Gint4.T 修饰 DNA 四面体通过靶向 PDGFRβ抑制胶质瘤细胞增殖

介绍

胶质瘤是一种源自神经上皮的肿瘤，是最常见的颅内恶性肿瘤。近 1/3 的脑肿瘤是神经胶质瘤，大约 4/5 的原发性恶性脑肿瘤是神经胶质瘤 [1,2,3,4]。目前，胶质瘤最有效的治疗方法是手术切除和术后同步放化疗，但不幸的是，患者的预后仍然很差。由于肿瘤靶向性差，血脑屏障（BBB）和血肿瘤屏障（BTB）引起的并发症以及药物靶向性不足，传统的胶质瘤化疗效果不佳。 BBB 是阻止几乎所有大分子（包括药物和基因）输送到脑实质及其正常功能的最重要因素。不能穿过 BBB 的药物必须以足够高的剂量给药，以在感兴趣的区域内达到有效的治疗浓度。然而，过量的药物会导致严重的全身副作用和不希望的药物在未受影响的组织中积累。此外，现有的常规抗胶质瘤药物靶向能力不足[3, 4]。纳米粒子已成为最有前途的载药工具。由于它们的尺寸优势，纳米粒子可以穿过 BBB 并发挥抗肿瘤作用。卡法等。 [5] 设计了针对 ANG 的化学功能化多壁碳纳米管 (f-MWNT)，并通过体内和体外实验证实了它们穿过 BBB 的能力。然而，这些纳米材料可能分布到全身各个器官甚至进入中枢神经系统（CNS），在那里它们可能会引起神经毒性[6]。

DNA 是构建纳米结构的理想材料，因为它的组装可以通过 Watson-Crick 碱基配对进行精确控制 [7]。迄今为止，已经设计并证明了许多二维 (2D) 和三维 (3D) DNA 纳米结构 [8,9,10]。四面体 DNA 纳米结构 (TDN) 因其生物相容性、稳定性、丰富的功能化修饰位点和低免疫原性而备受关注 [11,12,13]。特伯菲尔德等人。使用一步合成方法以高产率合成了 DNA 四面体纳米结构 [14]。沃尔什等人。发现含有核酸探针的 DNA 四面体可以在不需要转染试剂的情况下进入哺乳动物细胞 [15]。李等人。证明自组装四面体纳米粒子可用于体内靶向 siRNA 递送 [16]。 TDN在分子诊断、分子递送、靶向药物治疗等方面显示出良好的应用前景。它们还广泛用于各种器官肿瘤的研究，例如乳腺癌[17]。同样，TDN 也被用于神经系统疾病的研究。田等人。 [18]以DNA四面体为基础，用angiopep-2（ANG）对其进行修饰，成功构建了纳米探针ANG-TDN，可靶向低密度脂蛋白受体相关蛋白1（LRP-1）进行靶向成像。研究表明，ANG-TDN 可以跨越 BBB。马等人。 [19]提出四面体DNA纳米结构无需转染剂即可进入神经干细胞（NSCs），促进神经干细胞迁移、增殖和分化[20]，具有巨大的神经组织修复和再生潜力.因此，我们探讨了TDN用于胶质瘤治疗并增强其靶向能力的可能性。

血小板衍生生长因子受体 β (PDGFRβ) 是酪氨酸蛋白激酶家族的重要成员，参与细胞增殖、迁移和血管生成。几项研究表明，PDGFβ 是抗肿瘤治疗的有希望的靶点，因为它在血管生成中发挥作用 [21, 22]。适体是短的单链 DNA 或 RNA 寡核苷酸，通过指数富集 (SELEX) 方法通过配体系统进化产生。适体类似于抗体，它们对其靶标具有高亲和力和特异性 [23]。由于其独特的特性，适体在靶向递送化疗剂、siRNA 和载药纳米颗粒中发挥着重要作用。 Gint4.T 是一种可以特异性结合 PDGFRβ 的 RNA 适配体，也是一种 PDGFRβ 特异性拮抗剂 [24]。摩纳哥等。 [25] 建议 Gint4.T 适配体可以穿过血脑屏障 (BBB) 并特异性识别 PDGFRβ。 Gint4.T 偶联的聚合物纳米粒子 (PNP) 可以很容易地被胶质母细胞瘤 (GBM) 细胞吸收。在这项研究中，我们报告了一种结合 Gint4.T 适体和 TDN 的新型载药系统。负载DOX（DOX@Apt-TDN）的Gint4.T修饰的TDN（Apt-TDN）对U87MG细胞表现出增强的特异性细胞摄取和细胞毒性。

方法

材料

所有DNA寡核苷酸和2'F-Py RNA寡核苷酸均购自生工生物（中国上海），所有寡核苷酸序列见表1。 GelRed DNA凝胶染色液购自生工生物。胎牛血清 (FBS) 和 Dulbecco 改良 Eagle 培养基 (DMEM) 均购自 Thermo Fisher (New York, USA)。多柔比星（DOX）购自梦生物科技（中国重庆）。 U87MG 细胞购自上海生命科学院细胞库（中国上海）。 DAPI购自中山金桥生物科技（中国北京）。

DNA 纳米结构的制备

为了组装 DNA 四面体（表 1），将 2 μL 的每种寡核苷酸（S1、S2、S3 和 S4）添加到 42 μL 的 TM 缓冲液（10 mM Tris-HCl、5 mM MgCl2，pH =8）中。然后使用 Bio-Rad PCR 仪（美国加利福尼亚州）将 DNA 溶液加热至 95 °C 5 分钟，然后冷却至 4 °C 2 分钟 [26, 27]。 TDN的终浓度为2 μM。除了用 S1' 代替 S1 外，TDN' 的制备方法相同。为了合成 Apt-TDN，将 Gint4.T 适配体以等摩尔比加入 TDN，并将混合物在 37 °C 下孵育 60 分钟。在合成之前，适配体经过短暂的变性-复性步骤（85 °C 5 分钟，2 分钟内快速冷却，随后在 10 分钟内升温至 37 °C）[25]。

琼脂糖凝胶电泳

琼脂糖凝胶 (3%) 在 0.5 × TEB 缓冲液中以 100 V 运行 30 分钟。将电泳仪置于冰浴中，使电泳仪的温度保持在 0 °C。电泳前，将 GelRed 添加到琼脂糖凝胶中以染色 DNA 链。该过程完成后，使用 Bio-Rad 荧光扫描仪（美国加利福尼亚州）捕获凝胶图像。

动态光散射

Malvern Zetasizer ZS90 (Malvern, UK) 用于测量 TDN 的流体动力学尺寸和 zeta 电位。对总共1 mL的TDN（100 nM）进行动态光散射（DLS）分析。

原子力显微镜成像

用TM缓冲液（含有MgCl 2 的Tris-HCl缓冲液）将TDN稀释至100 nM。然后，将 10 μL 的每个 TDN 样品添加到新鲜切割的云母中并孵育 10 分钟。随后在交流模式下的原子力显微镜（AFM）仪器（Agilent 5500，USA）上对样品进行成像。

制备的TDN载药量的测定

将阿霉素溶解在去离子水中制成 500-μM 的储存溶液。将不同浓度（1 至 20 μM）的阿霉素与 TDN（100 nM）或 Apt-TDN（100 nM）在室温（24-26 °C）混合 6 小时。然后将混合溶液以 12,000×g 离心 10 分钟得到载药TDN。然后，取出 50 μL 上清液并与 PBS 以 1:1 的比例混合。 Varioskan LUX 酶标仪（美国加利福尼亚州）用于测量阿霉素（λ ex =480 nm 和 λ em =590 nm) 以确定上清液中阿霉素的含量 [28]。通过标准曲线和荧光强度计算加载在 TDN 中的阿霉素浓度。我们还以增加的摩尔比将阿霉素与 TDN 混合。

TDN 体外血清稳定性

将 TDN 与完全培养基混合并在 37 °C 下孵育 0、2、4、6、8、10、12 或 24 小时。 TDN 溶液与 FBS 以 1:1 的比例混合，并在 37 °C 下孵育 1、3、5 或 7 小时。孵育后，将混合物在 3% 琼脂糖凝胶上电泳。

体外 TDN 的细胞毒性

为了确定 TDN、U87MG 细胞在 1 × 10 ⁴ 浓度下的细胞毒性 细胞/孔接种到 96 孔板上。去除细胞培养基，加入含有0-500 nM TDN的新鲜培养基，并在孵育过夜后再孵育24 小时和48 小时。然后每孔加入10 μL的CCK-8溶液，孵育1 h。然后使用酶标仪测量450 nm处的吸光度。

荧光成像

通过荧光显微镜（Olympus，Tokyo，Japan）研究了 DOX 和 TDN 的细胞摄取。将 U87MG 细胞接种在 24 孔板的盖玻片上，培养基中含有 10% 热灭活胎牛血清和 1% 青霉素和链霉素，并在 37 °C 和 5% CO2 的湿润气氛中生长至少 1 天，直到细胞达到至少 75% 的汇合。温育后，除去培养基。添加含有 100 nM Cy3-TDN 和 Cy3-Apt-TDN 的完全培养基并孵育 3 h。 TDN 和 Apt-TDN 用 Cy3 标记以检测纳米颗粒的细胞间摄取。为了评估 DOX 的细胞摄取，将 DOX（DOX 2 μM）、DOX@TDN（DOX 2 μM）和 DOX@Apt-TDN（DOX 2 μM）加入到 U87MG 细胞中并孵育 3 h。处理3 小时后，将细胞用4%多聚甲醛在黑暗中固定20 分钟，随后用4',6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）染色5 分钟。 PBS洗细胞3次，荧光显微镜下观察。

流式细胞术

一共1×10 ⁶ U87MG细胞植入6孔板中。孵育过夜后，除去培养基，加入补充有 100 nM Cy3-TDN、100 nM Cy3-Apt-TDN 或 100 nM Cy3-Apt-TDN + 1 μM 游离 Apt 的培养基并孵育 3 h。然后用4%多聚甲醛固定细胞20 min，流式细胞仪检测Cy-3阳性细胞百分比。

细胞周期和细胞凋亡

用DOX、DOX@TDN或DOX@Apt-TDN处理24 h后，5×10 ⁵ 收集细胞并在 75% 冰冷的乙醇中固定过夜。然后，将细胞与 RNase 和碘化丙啶在 37 °C 下在黑暗中孵育 30 分钟。通过流式细胞术研究细胞周期。此外，不同处理后的细胞用Annexin V-FITC/DAPI染色，探索早期凋亡。

CCK-8 检测

为了确定细胞活力，U87MG 细胞 (5 × 10 ³ ) 接种到具有 100 μL 培养基的 96 孔板上，并在 37 °C 和 5% CO2 的气氛下培养过夜。随后除去培养基，加入含有 DOX、DOX-TDN 或 DOX-Apt-TDN 的新鲜培养基。培养24 h后，加入10 μL的CCK-8溶液，再培养1 h。酶标仪在450 nm处测定吸光度。

统计分析

本研究中的所有实验均一式三份进行，所有数据均以平均值及其标准偏差（平均值±SD）的形式呈现。使用 SPSS 24.0 程序（IBM，美国）进行统计分析。使用学生的 t 确定显着差异 测试，使用 P <0.05 表示组间差异显着。

结果

TDN 和 Apt-TDN 的合成和表征

TDN 由四种寡核苷酸（表 1）通过单步合成自组装而成，如前所述 [18, 29]。肿瘤靶向适体 Gint4.T 用于通过 Watson-Crick 碱基配对修饰 TDN。 DNA四面体包含四个面，每个面由一个寡核苷酸形成。因此，四个寡核苷酸彼此杂交形成 DNA 四面体（图 1a）。凝胶电泳分析显示在泳道4和5有一条明显的条带，表明TDN和Apt-TDN构建成功。与TDN相比，Apt-TDN的迁移率降低，表明Gint4.T适配体成功修饰了TDN。

一 DNA四面体和Gint4.T-TDN的合成。泳道 1：S1；车道2：S1+S2；泳道3：S1+S2+S3；车道4：S1+S2+S3+S4（TDN）；泳道 5：TDN 与 Apt-tail 混合（Gint4.T）； apt-TDN。泳道 1 不可见，因为核酸染料无法正确染色单链 DNA。 b AFM 图像显示 TDN 和 Apt-TDN 的高度为~2 nm。 c 通过动态光散射 (DLS) 确定 TDN 和 Apt-TDN 的粒径和 zeta 电位。 TDN 和 Apt-TDN 的平均粒径分别为 10.10 nm (A) 和 13.54 nm (B)。 TDN和Apt-TDN的平均zeta电位分别为- 5.69 mV (C)和- 7.3 mV (D)

TDN 和 Apt-TDN 的大小由 DLS 和 AFM 确定。 TDN 和 Apt-TDN 的粒径分别为 10.1 nm 和 13.5 nm，反映了 Gint4.T 配体的添加（图 1c（A），（B））。因为流体动力学直径包括水分子，所以颗粒大于它们的理论尺寸。由 AFM 图像确定的 TDN 和 Apt-TDN 的高度均为~2 nm（图 1b），表明适体修饰没有改变 3D 结构。 TDN和Apt-TDN的平均zeta电位分别为- 5.69 mV（C）和- 7.3 mV（D）（图1c（C）（D））。基于这些参数，我们得出结论，TDN和Apt-TDN已成功组装。

体外 TDN 的稳定性和细胞毒性

凝胶电泳分析表明，TDN 在完全培养基中在 37 °C 下培养 24 小时时保持完整（图 2a（A））。此外，当胎牛血清浓度增加到 50% 时，TDN 保持稳定至少 7 h（图 2a（B）），这与之前的报道一致 [18, 26]。为了确定纳米结构的细胞毒性，使用 CCK-8 测定来评估 U87MG 细胞在用多种浓度的 TDN 处理后的细胞活力。如图2b所示，在用0-500 nM的TDN处理24 小时和48 小时的U87MG细胞中没有观察到显着的细胞毒性。因此，DNA纳米粒子可作为稳定且生物安全的药物递送载体。

一 凝胶电泳显示TDN在37 °C的完全培养基中保持稳定24 h（A）；当胎牛血清浓度增加到 50% (B) 时，TDN 保持稳定 7 h。 b U87MG细胞与不同浓度（10-500 nM）的TDN共培养24 小时和48 小时。 CCK-8检测结果显示U87MG细胞活性不受影响，表明TDN的生物安全性

TDN 和 Apt-TDN 的载药量

阿霉素是一种广谱化疗药物，可以嵌入 DNA 双链。我们计算了标准的多柔比星曲线（图 3a），然后研究了多柔比星嵌入 TDN 的情况。随着阿霉素浓度的增加，TDN 和 Apt-TDN 中插入的阿霉素的量逐渐增加。当阿霉素浓度为 14 μM 时，插入 TDN 和 Apt-TDN 的阿霉素量分别在 5.5 μM 和 6.0 μM 达到峰值，随后趋于平稳（图 3b），表明 DNA 链被完全占据。同时，我们以增加的摩尔比将阿霉素与 TDN 混合。扫描阿霉素的荧光光谱进行分析。如图 3c 所示，阿霉素的荧光光谱被摩尔比为 0.05 的阿霉素淬灭。基于这些发现，我们得出结论，单个TDN中包含大约55个阿霉素分子，而单个Apt-TDN中包含60个分子。

一 PBS 缓冲液中 DOX 浓度的标准曲线； λex =480 nm 和 λem =590 nm。 TDN 和 Apt-TDN 携带的 DOX 量。 b DOX 插入到 TDN 和 Apt-TDN 的双链 DNA 中。当DOX浓度达到14 μM，TDN和Apt-TDN中插入的DOX浓度分别达到5.5 μM和6.0 μM时，一个DNA四面体可以携带55个Dox分子，而一个适配体修饰的DNA四面体可以携带60个DOX分子。 c 上清液中 DOX 的荧光光谱。阿霉素与 TDN 以增加的摩尔比（从上到下分别为 0、0.0005、0.001、0.005、0.01 和 0.05）混合。当摩尔比为1:20时，荧光被猝灭

Apt-TDN 的靶向细胞摄取

DNA 是一种带负电的大分子，这使得它很难进入带负电的细胞膜。通常，单个 DNA 分子必须在转染试剂的帮助下进入细胞。在这里，我们用 Cy3 标记 TDN 和 Apt-TDN 以监测纳米颗粒的细胞内摄取。与 U87MG 细胞孵育 3 h 后，细胞质中出现红色 Cy3 荧光信号，表明 TDN 与细胞膜结合并在没有转染剂帮助的情况下被吸收到细胞中（图 4a）。 Apt-TDN 显示出更高的红色荧光，这表明 Gint4.T 适体的存在显着增加了 U87MG 细胞对 DNA 四面体的摄取。然而，当添加游离适体时，Cy3 荧光降低到单独使用 TDN 时观察到的水平。由于游离适体的竞争性抑制，我们推断 TDN 上的适体不能促进 TDN 的摄取。基于这种竞争性抑制，我们证明了 Apt-TDN 可以靶向 U87MG 细胞。流式细胞术进一步证明Apt-TDN组Cy3阳性U87MG细胞百分比高于TDN组。 Free Apt降低了Apt-TDN组Cy3阳性U87MG细胞的百分比（图4b）。

一 U87MG 细胞摄取 TDN 和 Apt-TDN (TDN-Gint4.T)。 TDN无需转染剂直接进入U87MG细胞，Apt-TDN（与适配体Gint4.T相关）的摄取显着增加并被游离Apt（Gint4.T）竞争性抑制，表明适配体Gint4.T在细胞靶向中的重要作用。比例尺代表 50 μm。 b 流式细胞仪曲线显示孵育3 h后TDN、Apt-TDN和Apt-TDN+Apt的细胞内摄取

DOX@TDN 和 DOX@Apt-TDN 的细胞摄取

我们利用阿霉素的特征荧光光谱来评估药物吸收效率。处理 3 h 后，细胞内多柔比星通过荧光显微镜成像（图 5a）。游离多柔比星可进入U87MG细胞并位于细胞核内。添加 DOX@TDN 后，荧光强度高于游离多柔比星。该结果表明 DNA 纳米颗粒增强了阿霉素的细胞摄取。添加 DOX@Apt-TDN 后，细胞核中的红色信号甚至高于添加 DOX@TDN 的细胞。 DOX 细胞内摄取的半定量分析进一步证实，与单一药物相比，Apt-TDN 促进细胞内 DOX 摄取增加两倍以上。我们推断这是由于 Gin4.T 与受体特异性结合，随后更多的纳米颗粒可以进入细胞。在溶酶体中消化后，阿霉素可以释放到细胞质中并在细胞核中进一步发挥作用。

一 DOX、DOX@TDN 和 DOX@Apt-TDN 的细胞摄取。用适体 Gint4.T 修饰后，Apt-TDN 可以比 TDN 向 U87MG 细胞输送更多的阿霉素。此外，与单独使用药物相比，TDN 可以向细胞携带更多的药物。比例尺表示 50 μm。 b PBS、DOX、DOX@TDN和DOX@Apt-TDN处理后阿霉素荧光强度的半定量分析（与空白相比：*p <0.05, **p <0.01)

DOX、DOX@TDN 和 DOX@Apt-TDN 的细胞毒性

对于细胞毒性研究，三组 U87MG 细胞用不同浓度的阿霉素处理（图 6a）。阿霉素的 IC50 值对于 DOX 处理为 13.39 μM，对于 DOX@TDN 处理为 7.826 μM，对于 DOX@Apt-TDN 处理为 4.205 μM。在三种处理中，DOX@Apt-TDN 在 24 h 显示出最高的细胞毒性，这表明 Apt-TDN 对 U87MG 细胞具有特异性。 24 h后，收集DOX、DOX@TDN和DOX@Apt-TDN组的细胞，用于探索早期凋亡。我们的数据表明，DOX@Apt-TDN 组的早期细胞凋亡率高于其他两组（图 6b）。此外，与DOX和DOX-TDN组相比，DOX-Apt-TDN组G0/G1期细胞比例增加（p <0.01)，DOX-Apt-TDN组S期细胞比例降低(p <0.01)（图 6c）。 G2期细胞百分比没有变化（数据未显示）。

一 不同浓度的 DOX、DOX@TDN 和 DOX@Apt-TDN 的细胞毒性。 U87MG细胞的抑制率随着DOX浓度的增加而显着增加，但与DOX组相比，DOX@TDN和DOX@Apt-TDN组的细胞毒性显着增加。 DOX@Apt-TDN组的细胞抑制率也显着高于DOX@TDN组（与DOX相比，**p < 0.05;与 DOX 相比，***p <0.01;与 DOX@Apt-TDN 相比， ^# p <0.05)。 b U87MG 细胞与 PBS、DOX、DOX@TDN 和 DOX@Apt-TDN 孵育 24 h 后的细胞凋亡。 c U87MG 细胞周期在与 PBS、DOX、DOX@TDN 和 DOX@Apt-TDN 孵育 24 h 后的流式细胞术直方图（与对照相比，**p < 0.05;与对照相比，***p <0.01;与 DOX@Apt-TDN 相比， ^# p <0.01)

讨论

无论是通过体外还是体内实验，都必须确定药物及其载体的稳定性。 TDN 组装后，首先在体外测定其稳定性。这项研究表明，DNA 纳米粒子的 3D 结构可以通过抑制酶结合来提高其在血清中的稳定性。相关纳米结构的生物安全性是其应用的最重要要求。在与不同浓度的 TDN 共培养 24 小时或 48 小时的 U87MG 细胞中未观察到显着的细胞毒性。本研究中使用的 DNA 序列都没有编码任何遗传信息，并且在细胞毒性测试中没有报告任何副作用。因此，TDN可以作为一种安全稳定的药物载体。

适体修饰的纳米结构的靶向效率对于选择性药物递送至癌细胞至关重要。与抗体不同，适配体在化学上稳定、价格低廉，并且可以大量生产。此外，与其他材料不同，适体可以利用碱基互补原理轻松结合 DNA 四面体。因此，适体和 DNA 四面体的结合为靶向药物递送和下一代治疗奠定了基础。我们的结果表明，TDN 可以在没有转染剂的情况下进入细胞，这与 Walsh 等人的结果相似。和马等人。 [15, 19]。与TDN相比，U87MG细胞对Apt-TDN的摄取显着增加。添加游离适体后，这种增加消失了。该结果表明 Gint4.T 是一种 PDGFRβ 特异性拮抗剂 [25]。我们的研究表明，由于胶质瘤细胞表面 PDGGRβ 的高表达，Gint4.T 适配体可以靶向 U87MG 细胞。卡莫拉尼等人。 [24] 还表明 Gint4.T 适配体可以通过与 PDGFRβ 的细胞外结构域特异性相互作用来靶向肿瘤细胞。 Gint4.T 适体靶向的优势已通过体外研究在一定程度上得到证明，但需要进一步的体内测试来证实这些发现。该研究还证实，DOX@Apt-TDN 比 DOX 或 DOX@TDN 更具细胞毒性，这可能源于两个因素。首先，Gint4.T适配体可以特异性结合PDGFR胞外域，阻断肿瘤细胞增殖并抑制肿瘤细胞生长[24]。这与我们的实验结果一致。与对照组相比，DOX、DOX@TDN和DOX@Apt-TDN处理后U87MG细胞周期变化在G0/G1期肿瘤细胞中显着增加，在S期细胞中减少，在G0时阻断肿瘤细胞/G1期，表明它们可以抑制U87MG细胞的细胞周期并抑制其增殖。与DOX和DOX@TDN组相比，DOX@Apt-TDN组对U87MG细胞增殖的抑制能力明显更强。此外，Gint4.T 特异性结合肿瘤细胞并增强 DOX@Apt-TDN 复合物的细胞靶向性。因此，我们可以提高药物靶向效率，减少抗肿瘤药物的全身给药剂量，防止其全身副作用。

结论

Gint4.T 修饰通过靶向在神经胶质瘤细胞上大量表达的 PDGFRβ，提高了 TDN 在神经胶质瘤治疗中的特异性和效率。此外，当加载Apt-TDN时，它可以显着促进DOX的抗胶质瘤作用。因此，DOX@Apt-TDN 可以作为一种有前景的治疗胶质瘤患者的策略。本研究的不足在于仅在体外得到验证。在后续的研究中，我们将在动物模型中进一步探索。

数据和材料的可用性

相关数据包含在文章中。

缩写

BBB：

血脑屏障

BTB：

血肿瘤屏障

TDN：

四面体DNA纳米结构/DNA四面体

DOX：

阿霉素

PDGFRβ：

血小板衍生生长因子受体β

Apt-TDN：

Gint4.T-修改的TDN

DOX@TDN：

TDN 加载 DOX

DOX@Apt-TDN：

Gint4.T 修改后的 TDN 加载 DOX

中枢神经系统：

中枢神经系统

ANG：

Angiopep-2

LRP-1：

低密度脂蛋白受体相关蛋白1

SELEX:

Exponential enrichment

PNPs:

Polymeric nanoparticles

GBM:

Glioblastoma

FBS：

Foetal bovine serum

DMEM：

Dulbecco改良Eagle培养基

DLS：

动态光散射

原子力显微镜：

原子力显微镜

CCK-8:

Cell Counting Kit-8

Cy3:

Sulfo-Cyanine3

DAPI：

4′,6-Diamidino-2-phenylindole