高效一步绿色合成多功能金纳米粒子实现靶向肿瘤成像与治疗

摘要

金纳米粒子（GNPs）常作为多柔比星（DOX）传输载体用于肿瘤诊疗；但这类载体合成需先化学还原法制备GNPs，再与DOX或特定肽偶联，面临步骤多、成本高、耗时、制备复杂、后处理繁琐等共性问题。本文首创基于DOX化学构成的一步法制备DOX偶联GNPs。进一步利用DOX、RGD肽和核定位肽（NLS）自带还原官能团，一步法仅需30 min制备多功能GNPs（DRN-GNPs）。散射成像和细胞TEM研究显示DRN-GNPs可靶向HeLa细胞核。裸鼠瘤内注射和尾静脉注射DRN-GNPs肿瘤抑制率分别达66.7%和57.7%，显著优于对照组。一步法合成多功能GNPs不仅节省时间材料，更符合绿色化学发展方向，为近期大规模应用奠基。结果表明制备策略高效，制备DRN-GNPs生理系统中胶体稳定性好，是宫颈癌诊疗潜在造影剂和高效DOX传输载体。

引言

多柔比星（DOX）是常用抗癌药，广泛用于多种癌症化疗：血液恶性肿瘤[1]、多种腺癌[2-5]、软组织肉瘤[6]等。但长期大剂量DOX导致耐药[7]、恶心[8]、脱发[9]、急慢性毒性[10]、甚至充血性心衰[11]。故极需开发生物相容性好、药物负载高的药物载体。近年量子点[12,13]、壳聚糖[14,15]、硅纳米材料[16,17]、聚合物纳米材料[18-20]、荧光纳米粒子[21-24]、金属纳米材料[25-30]等被开发为DOX传输载体用于肿瘤诊疗。金纳米材料因独特化学光学性质、低毒性、好生物相容性、表面修饰可控性[31,32]在纳米材料中广泛应用。目前DOX偶联GNPs有三类方法：一是借助肼[25]、EDC[26]、pH敏感剂[27]、DCC/NHS体系[28]将DOX偶联GNPs表面；二是GNPs与DOX孵育≥24 h[29]；三是用DOX置换GNPs表面柠檬酸[30]。虽这些DOX偶联GNPs用于肿瘤治疗，但因特异性不足应用受限。近年El-Sayed团队[27]用DOX、RGD肽、核定位信号（NLS）肽功能化GNPs。亮点：GNPs经RGD肽受体介导内吞进入肿瘤细胞，再借NLS肽入核，使DOX有效干扰DNA合成。但逐层偶联肽/药需≥120 h，每步≥24 h。上述所有方法均面临步骤多、成本高、制备复杂、后处理繁琐等问题。故需开发简单快速合成多功能金纳米材料方法。

本文首创基于DOX化学构成一步法制备DOX偶联GNPs。进一步提出便捷合成法制备多功能DOX传输载体使DOX发挥更好效用，用于肿瘤诊疗。本工作关键区别：利用DOX、RGD肽、NLS肽作为还原剂和稳定剂制备GNPs，同时使三者偶联于GNPs表面形成DRN-GNPs。前期工作[33-35]证实RGD等肽可还原金离子制备金纳米材料。NLS N末端经半胱氨酸-半胱氨酸-酪氨酸（CCY）序列修饰构建CCYNLS，仍保留NLS靶向效应下可还原金离子[36]。我们还发现DOX在碱性条件下拥有两个强还原性酚羟基[37,38]，可还原金离子形成GNPs。且DOX抗肿瘤效应可能不受影响，因其通过碳7氨基和碳9羟基插入DNA[39]。同时肽和DOX上硫、氧、氮可与GNPs结合保持胶体稳定[33]。结果显示DRN-GNPs成功制备且在肿瘤成像、诊断、治疗中表现良好（方案1）。据我们所知，这是首例一步法合成DOX、RGD、NLS肽偶联多功能GNPs及其在肿瘤诊疗应用报道。

材料与方法

材料

HAuCl₄·4H₂O购自国药集团化学试剂有限公司。环状RGD肽（氨基酸序列精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-酪氨酸-谷氨酸，c(RGDyE)）和氢氧化钠同参考文献[35]。多柔比星购自桑园生物科技（上海）有限公司。CCYNLS肽（氨基酸序列半胱氨酸-半胱氨酸-酪氨酸-脯氨酸-脯氨酸-赖氨酸-赖氨酸-赖氨酸-精氨酸-赖氨酸-缬氨酸，CCYPPKKKRKV）由中国肽业有限公司（上海）提供。HeLa细胞系和MCF-7细胞系由广州优迪生物技术有限公司提供。胎牛血清（FBS）和Dulbecco改良Eagle培养基（DMEM）购自GibcoBRL Life Technologies。增殖细胞毒性测定试剂盒（MTT）购自北京鼎国长生生物技术有限公司。

DOX-GNPs、NLS-GNPs、DR-GNPs、DN-GNPs、DRN-GNPs合成

制备DOX-GNPs：磁力搅拌下将DOX溶液（0.2 mg/mL, 1.0 mL）加入氯金酸溶液（0.86 mM, 1.0 mL），加入NaOH（2 M, 5 μL）调节pH。制备NLS-GNPs：磁力搅拌下将CCYNLS肽溶液（0.5 mM, 1.0 mL）加入氯金酸溶液（3.44 mM, 1.0 mL），加入NaOH（2 M, 20 μL）调节pH。制备DR-GNPs：磁力搅拌下将DOX溶液（0.2 mg/mL, 1.0 mL）和RGD肽溶液（1.0 mM, 1.0 mL）加入氯金酸溶液（1.72 mM, 2.0 mL），加入NaOH（2 M, 15 μL）调节pH。制备DN-GNPs：磁力搅拌下将DOX溶液（0.2 mg/mL, 1.0 mL）和CCYNLS肽溶液（0.5 mM, 1.0 mL）加入氯金酸溶液（1.72 mM, 2.0 mL），加入NaOH（2 M, 20 μL）调节pH。制备DRN-GNPs：磁力搅拌下将DOX溶液（0.2 mg/mL, 1.0 mL）、CCYNLS肽溶液（0.5 mM, 1.0 mL）、RGD肽溶液（1.0 mM, 1.0 mL）加入氯金酸溶液（1.72 mM, 3.0 mL），加入NaOH（2 M, 35 μL）调节pH。所有反应100℃回流体系磁力搅拌持续30 min，pH 10-12。所有GNPs经55,000 rpm离心30 min（Optima MAX-TL, Beckman Coulter）纯化。弃上清液，超纯水重分散GNPs。

表征

GNPs光谱表征用UV 3150分光光度计（岛津，日本）、Nicolet Avatar FTIR 330光谱仪（Thermo，美国）、ESCALab250 X射线光电子能谱（XPS，同参考文献[35]分析条件）。GNPs透射电镜（TEM）图像来自TEM（JEM-2100F, JEOL, Japan），加速电压200 kV。

动态光散射与Zeta电位测量

Zeta PALS Zeta电位分析仪（Brookhaven Instrument Corporation）测量DOX-GNPs、NLS-GNPs、DR-GNPs、DN-GNPs、DRN-GNPs动态光散射（DLS），90°角、固态激光器（λ=670 nm）、室温工作。配备AQ-827电极时测量GNPs zeta电位。

ICP分析

GNPs中Au定量分析同参考文献[35]。

DR-GNPs、DN-GNPs、DRN-GNPs在PBS、HCl、NaOH、NaCl溶液中稳定性

分别混合100 μL沉淀GNPs与500 μL高浓度0.2 M PBS、0.5 M HCl、0.5 M NaOH、1.0 M NaCl溶液。12 h后拍照并测UV吸收光谱。

细胞培养

HeLa和MCF-7细胞在5% CO₂平衡空气湿润培养箱37℃培养24 h。培养基为含10% FBS的DMEM。血球计数板计数活细胞数。

游离DOX与DRN-GNPs细胞毒性测定

指数期HeLa和MCF-7细胞接种96孔板（约5×10³ cells/well）培养24 h。分别加入浓度0,20,40,60,80,100 μg/mL DRN-GNPs（对应DOX浓度0.0,7.8,15.6,23.4,31.2,39.0 μg/mL）共孵育24 h。对照组仅加PBS缓冲液，活性设100%。加入MTT（20 μL, 5 mg/mL）37℃孵育约4 h。小心吸除培养基，每孔加150 μL二甲基亚砜溶解结晶10 min。微孔板读数仪（Thermo Multiskan Mk3）测490 nm OD值。每组3复孔，值表达为均值±标准差。

流式细胞术实验

指数期HeLa和MCF-7细胞接种两个12孔板（约5×10⁴ cells/well）培养24 h。分别加入DRN-GNPs溶液（终浓度0,20,40,60,80,100 μg/mL）37℃孵育24 h。去除培养基加入胰蛋白酶（含EDTA）消化细胞。去除胰蛋白酶加培养基，转入离心管。1000 g离心5 min，弃上清收集各管细胞PBS重悬计数。取约5-10×10⁴细胞入另一离心管再1000 g离心5 min。弃上清加100 μL AnnexinV缓冲液。加5 μL AnnexinV-FITC和5 μL碘化丙啶（PI）轻混。暗室温（20-25℃）孵育15 min，流式细胞仪（BD Accuri C6）检测。

细胞培养暗场散射成像与透射电镜研究

HeLa和MCF-7细胞接种8孔细胞培养滑片（约7×10³ cells/孔）。各孔加入终浓度35 μg/mL DRN-GNPs。孵育24 h后用PBS洗涤3次物理去除游离吸附GNPs。4%多聚甲醛固定20 min，滴甘油，盖玻片封片。暗场显微镜（Zeiss Imager Z1）×200放大反射模式评估细胞。亮场/暗场曝光时间分别1 ms/400 ms（5 V电压）。

TEM研究：HeLa和MCF-7细胞用DRN-GNPs（35 μg/mL）孵育24 h。吸除培养基和DRN-GNPs混合液，PBS洗3次，胰蛋白酶消化。细胞转入离心管加少量DMEM培养基。1500 rpm离心10 min，小心吸除DMEM，加入3%戊二醛（通常为材料体积40倍）固定管底细胞>1 h。再加1%四氧化锇固定1 h，乙醇脱水，Spurr（Sigma-Aldrich, USA）包埋。取出切片，醋酸铀和柠檬酸铅染色，铜网（300目）负载。FEI TECNAI-12透射电镜（工作电压120 kV）测量样品。

动物实验

实验动物

胸腺缺陷雌性裸鼠购自南方医科大学实验动物中心（广州，中国）用于体内抗肿瘤测试。所有动物实验遵守中华人民共和国卫生部实验动物管理规则（2001年第55号文件）和中国药科大学实验动物护理使用指南。

游离DOX及其偶联物在负瘤小鼠治疗功效

简述：36只裸鼠（5-6周龄，16-18 g）随机分六组。右腋窝皮下注射HeLa细胞（5×10⁶ cells PBS悬液）。5天后对照组尾静脉注射生理盐水（0.154 mol/L, 0.2 mL）。游离DOX、DR-GNPs、DN-GNPs、DRN-GNPs组尾静脉注射。为对比DRN-GNPs静脉注射与瘤内注射抗肿瘤功效，设一组瘤内注射等量DRN-GNPs。五组每只小鼠维持0.3 mg/kg等量游离或偶联DOX剂量。每鼠每日尾静脉或瘤内注射1次。连续14天每日监测体重和瘤体积。14天治疗后切除六组瘤体病理分析。分离小鼠瘤组织及心肝脾肺肾，10%中性缓冲福尔马林固定石蜡包埋。瘤切片苏木精-伊红（H&E）染色，奥林巴斯光学显微镜检查。

结果与讨论

DOX-GNPs、NLS-GNPs、DN-GNPs、DR-GNPs、DRN-GNPs合成表征

合成DOX-GNPs时加入NaOH溶液，DOX与氯金酸混合液颜色立即从橙变浅紫，100℃回流磁力搅拌1 min变酒红色，表明DOX-GNPs形成。结果显示DOX还原能力极强，因DOX碱性条件下拥有两个强还原性酚羟基（6号和11号碳）。反应持续30 min至颜色不变。

为避免DOX橙红色与GNPs酒红色混淆，用UV吸收光谱提供更多证据（图1a）。DOX在485 nm和530 nm有特征吸收峰；但产物溶液谱中480 nm峰消失，出现GNPs特征表面等离子体共振（SPR）吸收峰520 nm。即便如此，GNPs 520 nm与DOX 530 nm峰间形成仍未完全确定。考虑GNPs高速离心沉淀而DOX分子不沉淀，离心管底部见紫色沉淀（图1a插图3-4），DOX无此现象（插图1-2）。

DOX在365 nm紫外光照射下有红色荧光；但合成GNPs后DOX荧光消失。两可能原因：一是GNPs消光系数强，距GNPs表面<5 nm时倾向淬灭分子荧光[40]；距离增至≥20 nm时纳米粒子等离子体场太远无法淬灭荧光[41]。二是DOX荧光基团经还原剂角色后被破坏。图1c显示DOX-GNPs红外吸收峰数显著少于DOX，但保留DOX多特征：2910 cm⁻¹（C-H伸缩振动）[42]、1631 cm⁻¹（羰基伸缩振动）[43]、1114 cm⁻¹（C-O, C-N伸缩振动）[44]、867 cm⁻¹（N-H, C-H面外弯曲振动）[45]。这些DOX代表峰在DOX-GNPs谱中显示，表明DOX成功结合DOX-GNPs。有趣的是1214 cm⁻¹酚羟基C-O伸缩振动特征峰[46]在DOX-GNPs谱中消失。酚基还原Au离子为GNPs后转化为羰基。我们推测DOX效应不受影响，因其通过碳7氨基和碳9羟基插入DNA[39]。

TEM结果（图1b）观察DOX-GNPs粒径约6 nm。DOX-GNPs XPS谱（图1d）计算Au(I)比例31.93%，足维持胶体稳定性。但DOX-GNPs沉淀分散0.2 M PBS高速离心除上清后溶液变紫黑并有可见不溶絮状物。表明DOX-GNPs高盐环境稳定性不佳。解释：DOX仅有一氨基无巯基，不足通过Au-S和Au-N键连接GNPs表面。若DOX-GNPs用作造影剂和抗肿瘤材料需更多努力。

我们用DOX、RGD肽、NLS肽作还原稳定剂合成DRN-GNPs。RGD肽特异靶向过表达α_vβ₃整合素肿瘤细胞，NLS肽特异靶向细胞核。图2a显示制备DOX-GNPs、NLS-GNPs、DRN-GNPs UV-Vis谱，表面等离子吸收峰特征520-530 nm[33]。插图显示GNPs亮酒红色。TEM图像（附件1：图S1）显示NLS-GNPs和DRN-GNPs粒径约10 nm和5 nm，GNPs均匀分布无明显凝聚。

为验证NLS-GNPs和DRN-GNPs合成，表征NLS肽和GNPs FTIR谱（图2c）。NLS-GNPs和DRN-GNPs谱中发现NLS肽部分FTIR峰：C-H伸缩振动吸收峰（2840-2972 cm⁻¹）[47]、C=O伸缩振动吸收峰（1630-1700 cm⁻¹）[48]、=C-H面内弯曲振动峰（1300-1475 cm⁻¹）[49]；表明CCYNLS肽成功偶联GNPs表面。还发现NLS肽酪氨酸末端苯骨架振动峰1529 cm⁻¹和酚羟基C-O伸缩振动峰1193 cm⁻¹[49]在NLS-GNPs和DRN-GNPs红外谱中消失，意味着酪氨酸末端苯骨架经还原剂角色后转化为醌结构。

高速离心DRN-GNPs收集近无色上清液，用UV-Vis谱检测残留反应物（图2b）。RGD和NLS肽UV吸收峰源自酪氨酸残基，吸收峰275 nm。碱性条件下酚羟基成负氧离子增加苯环电子密度，峰红移至292 nm。DRN-GNPs上清UV-Vis谱未见特征峰，表明两肽全参与反应。DOX在450-600 nm有三吸收峰，DRN-GNPs上清无这些峰。且上清未见DOX，因其碱性下淡紫透明而上清淡褐。可结论三物质几乎完全反应。同理DR-GNPs和DN-GNPs亦如此，见附件1：图S2。

用XPS检测NLS-GNPs和DRN-GNPs Au价态。图3a,b显示~83.6 eV和~87.0 eV两峰对应Au 4f_7/2和4f_5/2光电子发射[33]。两GNPs Au 4f_7/2结合能位置近84.0 eV。NLS-GNPs可解卷为Au(0)（83.5 eV）和Au(I)（84.1 eV），峰面积比57%和43%。DRN-GNPs类似解卷为Au(0)（83.6 eV）和Au(I)（84.4 eV），峰面积比62%和38%，Au(I)比例更高。电荷可形成Au(I)-S配合物助维持GNPs胶体稳定性。有趣的是在NLS-GNPs、DN-GNPs、DRN-GNPs XPS谱中识别出三种S（附件1：图S3）。蓝黑曲线代表硫氧化态，紫曲线代表S-H键，绿曲线代表Au-S键。Au-S键形成说明NLS肽成功偶联这三种GNPs表面。

此外XPS谱N 1s、C 1s、O 1s峰证明肽和DOX附着GNPs（附件1：图S4）。

XRD谱（附件1：图S5）显示这些GNPs晶体结构为面心立方晶体，因所有XRD谱含38.2°、44.5°、64.7°、77.8°四峰对应（111）、（200）、（220）、（311）晶面[33]。

DRN-GNPs稳定性

五种GNPs动态光散射（DLS）和zeta电位数据见表1；水动力学尺寸大于TEM表征值，归因于水溶性GNPs核心周围一定量水合分子。zeta电位因表面羧基呈负值。|zeta电位|>30 mV时GNPs溶液胶体稳定性好；绝对值越大稳定性越好。表1显示均具良好胶体稳定性。对比NLS-GNPs zeta电位绝对值最高，可能因表面满布NLS肽经巯基形成强Au-S键。DOX-GNPs zeta电位绝对值接近30 mV，与前文DOX-GNPs分散PBS缓冲液稳定性不佳一致。光谱数据见附件1：图S6。

利用UV-Vis光谱GNPs特征表面等离子共振（SPR）带变化判断GNPs聚集[49]。测量DRN-GNPs分散于高盐（1 M NaCl、0.2 M PBS）、强酸（0.5 M HCl）、强碱（0.5 M NaOH）溶液时UV-Vis谱并拍照（图3c）。除HCl溶液外各恶劣条件下均无溶液变色或UV-Vis谱位移。HCl中颜色微变紫、紫外吸收峰红移约20 nm，意味着GNPs强酸条件下轻微凝聚。原因可能负电荷GNPs胶体稳定性受强酸影响，但中性PBS缓冲液和碱性环境不受影响。可结论DRN-GNPs高盐碱条件下高度稳定，预期可用于体外细胞成像和体内抗肿瘤治疗。

肿瘤细胞等离子体暗场散射成像与细胞透射电镜

DRN-GNPs靶向肿瘤细胞特异性成像选HeLa细胞作测试组、MCF-7细胞作对照组。因HeLa细胞过表达整合素α_vβ₃[50]而MCF-7不表达，无RGD特异性结合，为良好对照[51]。终浓度35 μg/mL DRN-GNPs孵育24 h后直立荧光显微镜暗场模式评估两细胞系摄取。未处理GNPs细胞无等离子体光散射（图4 A-HeLa，5C-MCF-7）。HeLa细胞经DRN-GNPs处理图像显示GNPs散射信号高度定位于细胞核（图4b、5e）。但MCF-7细胞经DRN-GNPs孵育后几乎不见散射光，虽少量GNPs可能经肿瘤细胞被动增强渗透滞留效应（EPR效应）进入（图4d、5f），EPR效应是实体瘤特有现象：血管生成致高血管密度、瘤血管内皮细胞间大间隙、瘤组织对大分子药物选择性渗出滞留[52]。同等实验条件下可能不清晰检测。结果证明RGD肽促进HeLa细胞受体介导内吞，NLS肽保持活性特异靶向细胞核。合成DRN-GNPs可作极具潜力肿瘤靶向成像造影剂。

表2显示同一图像中细胞测密平均灰度与背景比值，与两细胞系摄取DRN-GNPs量正相关。PBS缓冲液孵育细胞和MCF-7细胞比值近1.0，细胞亮度近背景。HeLa细胞孵育DRN-GNPs比值4.80，表明合成DRN-GNPs可特异靶向进入过表达整合素α_vβ₃肿瘤细胞。

为证实DRN-GNPs受体特异性内化，用TEM技术研究HeLa和MCF-7细胞摄取DRN-GNPs（图5）。α_vβ₃阳性HeLa细胞核区和细胞质区定位大量DRN-GNPs（图5 A₁-A₃）。α_vβ₃阴性MCF-7细胞细胞质区仅发现极少量颗粒（图5 B₁-B₂），可能经被动靶向EPR效应累积。发现MCF-7细胞核高对比度黑色连续区为醋酸铀染色核，不同于HeLa细胞核颗粒状颗粒。TEM图像与暗场成像结果一致，表明GNPs表面RGD和NLS肽促进DRN-GNPs靶向HeLa细胞核。合成DRN-GNPs可作完美肿瘤靶向成像诊断造影剂。

细胞治疗功效评价

评价DOX和DRN-GNPs细胞水平治疗功效，MTT法研究HeLa和MCF-7细胞24 h处理后活力。相同DOX浓度（39.0 μg/mL）下DRN-GNPs杀灭近70%细胞，抑制效果近似（图6A,B）。结合MTT结果，DRN-GNPs 40 μg/mL浓度下HeLa和MCF-7细胞数状态较好，35 μg/mL为成像适宜浓度。观察DRN-GNPs浓度达60 μg/mL时（图6C₃）HeLa细胞明显坏死。浓度达100 μg/mL时细胞数显著减少，观察到坏死特征性细胞形态改变。同浓度偶联DOX仍展现近似游离DOX抗肿瘤功效。结果表明合成DRN-GNPs不仅可作造影剂亦是良好药物递送系统。

图7流式细胞术结果亦证实DRN-GNPs抗肿瘤功效。基于流式检测测不同浓度DRN-GNPs暴露HeLa细胞活力。用AnnexinV-FITC和PI染料分别测细胞凋亡和坏死两种死亡模式（图7）。同MTT结果，数据显DRN-GNPs诱导细胞坏死呈剂量依赖性。未孵育DRN-GNPs坏死细胞比例8%；浓度达100 μg/mL时坏死比例23.84%；表明合成DRN-GNPs高效杀灭HeLa细胞。MTT与流式结果差异可解释为细胞数和方法差异。

负瘤小鼠DRN-GNPs治疗评价

为进一步确定DRN-GNPs体内对肿瘤细胞联合治疗效果，长期静脉注射药物评价负瘤小鼠DRN-GNPs抗肿瘤效果。生理盐水组和游离DOX、DR-GNPs、DN-GNPs静脉注射组为对照，偶联DOX浓度同游离DOX。观察DRN-GNPs处理组瘤体积明显小于生理盐水、DOX、DN-GNPs、DR-GNPs组（图8a）。每2天监测小鼠瘤体积和体重。所有处理组间瘤体积和瘤重显著差异见图8d,f；DN-GNPs和DR-GNPs组瘤体积和瘤重小于游离DOX组但仍大于DRN-GNPs组，因靶向活性较弱。可能因DOX分子小、缺乏靶向、体内半衰期短，快速清除。但DRN-GNPs血液系统稳定性强、半衰期长、高靶向能力，可靶向瘤部位发挥DOX抗肿瘤效应。DRN-GNPs静脉注射与瘤内注射组间，后者抗肿瘤功效优于前者，因药物无需复杂血液循环到达病灶。DOX肿瘤抑制率<50%，所有DOX偶联GNPs>50%，高达66.7%和57.7%。HE染色显示静脉注射DRN-GNPs组肝脏有一定损伤（图9）。此外DOX、DR-GNPs、DN-GNPs对负瘤小鼠生物毒性经组织学分析评估。图8b显示生理盐水组瘤细胞体积相对较大，有丝分裂象更多。所有结果显示DRN-GNPs肿瘤抑制效果在GNPs中最佳。合成DRN-GNPs可作完美DOX递送系统用于肿瘤治疗。

结论

本研究成功开发约半小时一步法制备多功能DRN-GNPs。GNPs成功应用于体外体内肿瘤靶向成像和治疗。成功表明可充分利用DOX、RGD肽、CCYNLS肽还原稳定能力，使GNPs合成过程简单高效。更重要一步合成DRN-GNPs仍具生理系统良好胶体稳定性，表面偶联肽保留靶向能力，DOX保留抗肿瘤能力。据我们所知，这是首例一步法合成DOX、RGD、CCYNLS肽偶联多功能GNPs及其在肿瘤成像、诊断、治疗应用报道。此策略符合绿色化学发展方向，为近期大规模应用奠基。期望本报告为肿瘤成像治疗用多功能纳米材料一步合成提供新思路。