靶向miR-410/Wnt-11调节成骨抑制破骨细胞治疗股骨头坏死

摘要

背景

关于微小RNA-410（miR-410）在股骨头坏死（ONFH）中的功能知之甚少，本研究旨在探讨miR-410靶向Wnt-11调节成骨和破骨机制以预防ONFH。

方法

收集15例ONFH样本和15例正常样本。观察临床样本中股骨头病理变化、成骨细胞和破骨细胞情况。建立大鼠ONFH模型，分别注射agomir-miR-410、Wnt-11-siRNA或oe-Wnt-11。通过RT-qPCR和Western blot检测miR-410、Wnt-11、成骨相关因子碱性磷酸酶（ALP）、骨γ-羧基谷氨酸蛋白（BGLAP）、Collα1表达，破骨相关因子酸性磷酸酶5（ACP5）、组织蛋白酶K（CTSK）、MMP9，以及Bcl-2和Bax表达。ELISA检测血清成骨功能指标ALP、OCN和破骨功能指标NTX-1、CTX-1。

结果

临床ONFH组织中miR-410、ALP、BGLAP、Collα1下调，Wnt-11、ACP5、CTSK、MMP9上调。上调miR-410和下调Wnt-11提高大鼠骨矿物质密度（BMD）和骨体积分数（BV/TV），增加股骨干、股骨头、脊柱BMD水平，升高血清钙磷水平，抑制成骨细胞凋亡，上调OCN、ALP、BGLAP、Collα1表达，下调ACP5、CTSK、NTX-1、CTX-1、MMP9表达。

结论

上调miR-410或下调Wnt-11可增加成骨细胞、减少破骨细胞，缓解ONFH发生。miR-410可作为治疗ONFH的潜在靶点。

引言

股骨头坏死（ONFH）是累及髋关节最常见疾病之一，导致剧烈疼痛或关节功能丧失，多发于中年人。中国成人ONFH患者达812万，治疗仍是外科挑战。高脂血症、自身免疫病、凝血障碍、酗酒、皮质醇增多症等为危险因素。手术治疗包括带或不带辅助的核心减压术（如自体骨髓），全髋关节置换术（THR）用于老年或关节保留治疗无效的晚期患者。但ONFH预后不佳，常需THR。亟需探索准确治疗靶点。

微小RNA（miRNA）是细胞功能和基因表达的主要调控因子，对内皮稳态影响巨大，或成新疗法。研究显示miR-410在多种恶性肿瘤异常表达，可作为子宫内膜癌、肺癌、骨髓瘤、乳腺癌的抑癌因子。miR-410通过抑制PTEN/AKT/mTOR通路对帕金森病细胞模型有神经保护作用。miR-410靶向FKBP5和AKT通路调节儿童急性淋巴细胞白血病恶性行为。miR-410靶向血管紧张素II型1受体抑制胰腺癌。Wnt蛋白是半胱氨酸富集分泌脂糖蛋白，在发育和疾病中关键作用。Wnt-11属Wnt信号通路，是致癌正向调节因子。Wnt11在宫颈癌中临床意义已被报道。TGF-β1和Wnt11协同信号通过Rho激酶-肌动蛋白-MRTF-A信号驱动平滑肌sm-α-actin表达。基于上述文献，本研究旨在探讨miR-410调节Wnt-11预防ONFH的作用，假设miR-410靶向Wnt-11可调节成骨和破骨机制以预防ONFH。

材料与方法

伦理声明

研究经北京石景山医院首都医科大学机构审查委员会批准，遵循赫尔辛基宣言。受试者提供书面知情同意。动物实验符合NIH实验动物护理指南，经该院动物实验伦理委员会许可。

研究对象

选取2017年1月至2018年9月北京石景山医院骨科收治的30例患者。其中15例ONFH行THR手术，中位年龄50.6±4.3岁，体重57.0±5.6 kg，7男8女（ONFH组）。另15例股骨颈骨折行THR手术，中位年龄59.6±3.3岁，体重50.0±5.6 kg，9男6女（对照组）。两组性别、年龄、体重无显著差异（P>0.05），可比性好。沿股骨头纵向凿取软骨下坏死区组织，-80°C保存。各组分别行病理和分子生物学检查。

HE染色

样本用4%多聚甲醛固定，10% EDTA脱钙，每周换液。观察骨样本颜色测定脱钙程度。完全脱钙后石蜡包埋，切4 μm切片。烘烤切片，二甲苯I、II各10分钟脱蜡，梯度乙醇脱水。苏木精染色3分钟，1%盐酸酒精分化2分钟。50%、70%、80%乙醇各2分钟，伊红染色5秒。95%乙醇、无水乙醇I、II各3分钟，二甲苯I、II各5分钟。中性树脂封片，显微镜观察。

ALP染色

每样本选一片，60°C烘烤60分钟。二甲苯I、II各15分钟脱蜡，梯度乙醇脱水，三蒸水洗3次。滴加ALP染色试剂盒（南京建成生物工程研究所）底物液，37°C避光孵育15分钟。弃染液，滴加显色剂A 5分钟，三蒸水洗30秒。显色剂B染色30秒，复染试剂30秒。200倍光学显微镜拍照，图像分析系统（Image-Proplus 6.0）计数成骨细胞数。

TRAP染色

每样本选一片，60°C烘烤60分钟。二甲苯I、II各15分钟脱蜡，梯度乙醇脱水。固定液固定30秒。放入染色架，置于新配制TRAP染色液（Sigma）中，37°C水浴1小时。苏木精复染2分钟，干燥。因TRAP染色随时间衰减，不封片直接显微镜检查。200倍光镜拍照，图像分析系统计数破骨细胞数。

免疫组化染色

脱钙后石蜡包埋，切4 μm切片。常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水，3% H₂O₂ 7°C孵育30分钟，0.01 M柠檬酸缓冲液95°C修复20分钟。正常羊血清封闭10分钟，一抗Wnt-11（1:100, Invitrogen）4°C过夜，二抗（PV-6000, ZSGB-Bio）20分钟，辣根过氧化物酶标记链霉亲和素工作液（S-A/HRP, 北京ComWin）2分钟。DAB显色（Sigma），苏木精复染，封片。PBS替代一抗作阴性对照。显微镜下阳性细胞胞质呈褐色反应物，强阳性深褐黄，弱阳性浅褐黄，阴性无色。每切片观察5个高倍视野（400×），每视野数100细胞，取平均值。按阳性细胞比例和分布判定：阴性（-）<5%；弱阳性（+）5-24%；阳性（++）25-50%；强阳性（+++）>50%。双盲评分由两人独立评价。

RT-qPCR

Trizol试剂盒（Invitrogen）提取总RNA，测定浓度纯度。引物由Takara Bio设计合成（附件1：表S1）。PrimeScript RT试剂盒（Takara）逆转录cDNA。SYBR Premix Ex Taq II试剂盒（Takara）荧光定量PCR，ABI PRISM 7300系统（Applied Biosystems）运行。U6为miR-410内参，GAPDH为Wnt-11、ALP、BGLAP、Collα1、ACP5、CTSK、MMP9、Bcl-2、Bax内参。2^(-ΔΔCt)法计算相对转录水平。

Western Blot

提取股骨头组织总蛋白，测定浓度并调整上样量。制备10% SDS分离胶和浓缩胶。冰浴离心后等量电泳，转印至硝酸纤维素膜。5%脱脂奶粉4°C封闭过夜。一抗：Wnt-11（1:150, Santa Cruz）、ALP（1:100, Sigma）、BGLAP、Collα1、MMP9（1:1000）、ACP5（1:100）、CTSK（1:500, Abcam）、Bcl-2、Bax（1:500, Proteintech）4°C过夜。二抗IgG（1:1000, 武汉伯斯特）HRP标记，孵育1小时。ECL发光液（Pierce）显影1分钟，除液，保鲜膜覆盖，显影定影后观察。GAPDH内参，ImageJ2x软件分析蛋白印迹。

大鼠ONFH模型建立

选90只雄性SD大鼠（上海SLAC），300-350 g。环境18-25°C，湿度45-70%，单笼饲养避噪。适应性饲养1周后实验。创伤性ONFH建模：腹腔麻醉，剥皮备皮，切开皮肤分离组织，暴露股骨头后切断圆韧带。刮除大鼠股骨颈骨膜，破坏股骨头周围血供。分层缝合关节囊、肌肉、皮肤，消毒。

动物分组

70只成功建模大鼠分7组，每组10只：ONFH组；agomir-NC组（建模1周后髋关节周围注射0.5 mL miR-410激动剂NC，200 nM，广州核酸生物）；agomir-miR-410组（注射0.5 mL miR-410激动剂，200 nM）；siRNA-NC组（注射0.4 mL沉默Wnt-11载体NC，含1×10^9 PFU，上海基因化学）；Wnt-11-siRNA组（注射0.4 mL沉默Wnt-11载体，1×10^9 PFU）；agomir-miR-410+OE-NC组（注射0.5 mL miR-410激动剂+0.4 mL上调Wnt-11载体NC，1×10^9 PFU）；agomir-miR-410+OE-Wnt-11组（注射0.5 mL miR-410激动剂+0.4 mL上调Wnt-11载体，1×10^9 PFU）。另设正常组（仅腹腔注射生理盐水，10只）对照。建模4周后行微CT、骨形态测量、X线、骨密度、血清钙磷检测。

微CT检测与骨形态分析

大鼠右股骨头置于微CT机（GE），扫描标准模体。参数：分辨率27 μm³，管流450 mA，管压80 kV，单次扫描88分钟。详细观察股骨头微观结构。校准后随机选取三个长方体ROI（0.5 cm³）重建。GE Microview软件处理图像，骨形态学分析BMD和BV/TV参数。

X线观察、BMD测定、血清钙磷测定

术后4周，腹腔注射10%氯醛醛麻醉。仰卧固定肢体，X线摄影观察股骨头形态密度变化。双能X线骨密度仪测左股骨干、股骨头、脊柱骨密度。术前12小时禁食，清晨心穿取血5 mL，真空凝血管，3000 r/min离心15分钟分离血清，全自动生化分析仪测钙磷水平。

电镜观察

骨组织3.5%戊二醛固定，5%盐酸和1%四氧化锇脱钙，丙酮梯度脱水，醋酸铀和柠檬酸双染，Epon-61包埋。半薄切片后超薄切片，透射电镜观察。

TUNEL实验

石蜡切片常规脱蜡脱水。胃蛋白酶（0.25-0.5%盐酸）消化25分钟，滴加50 μL TUNEL反应液，湿盒孵育60分钟，滴加50 μL过氧化物酶，湿盒30分钟。DAB显色，显微镜观察有无着色。水终止显色，苏木精染色2分钟。95%乙醇I-II、无水乙醇I-II各3-5分钟，二甲苯I-II各3-5分钟，中性树脂封片。光镜分析。

ELISA

麻醉后取股动脉血，静置1小时离心取血清。按ELISA试剂盒（上海酶联生物）说明：标准孔加不同浓度标准品100 μL，空白孔加稀释液100 μL，其余孔加待测样本100 μL。封膜37°C孵育1小时，弃液。加酶结合物100 μL，封膜1小时。洗板后加B液100 μL，封膜30分钟。加TMB底物90 μL，封膜10-20分钟，加终止液50 μL。酶标仪测OD值，计算样本实际浓度。

双荧光素酶报告基因实验

TargetScan（https://www.targetscan.org）预测miR-410与Wnt-11 3'UTR结合位点。将含miR-410结合位点的Wnt-11 3'UTR启动子序列插入pMIR-REPORT Luciferase载体（Ambion）构建Wnt-11-WT质粒。突变结合位点构建Wnt-11-MUT质粒。质粒提取试剂盒（Promega）提取，对数期细胞接种96孔板。融合度约70%时，Lipofectamine 2000转染。Wnt-11-WT和Wnt-11-MUT分别与mimics NC和miR-410 mimics（上海基因化学）共转染293T细胞。转染48小时收集细胞裂解，荧光素酶检测试剂盒（BioVision）和Glomax 20/20发光计（Promega）测荧光素酶活性。

统计分析

SPSS 21.0处理数据。计量资料均数±标准差。多组比较单因素ANOVA，两组比较t检验，ANOVA后用Fisher LSD-t检验。P<0.05为统计学显著差异。

结果

临床样本ONFH组织病理改变

HE染色观察股骨颈骨折组（对照）和ONFH组股骨头病理变化：对照组骨小梁密度均匀、结构完整；ONFH组骨小脑中空骨腔多、骨细胞减少、骨小梁持续变化，骨小脑周围组织增生（图1a）。

TRAP染色显示TRAP主要存在于破骨细胞，常用鉴别成熟破骨细胞。与对照组相比，ONFH组TRAP阳性破骨细胞数增加，形态多样，细胞大、多核。破骨细胞邻近骨小脑见明显骨缺损，显示骨吸收（图1b）。

ALP染色结果：ALP为成骨细胞分化成熟标志酶，参与骨基质成熟钙化调节，常用鉴别成骨细胞。成熟成骨细胞胞质见褐色或咖啡色颗粒。与对照组相比，ONFH组ALP阳性成骨细胞数减少（图1c）。

临床ONFH组织中miR-410、ALP、BGLAP、Collα1下调，Wnt-11、ACP5、CTSK、MMP9上调

Western blot和RT-qPCR显示：ONFH组miR-410表达低于对照组，Wnt-11表达升高；成骨相关因子ALP、BGLAP、Collα1下调；破骨相关因子ACP5、CTSK、MMP9上调（均P<0.05）（图2a-c）。

免疫组化检测Wnt-11表达：Wnt-11蛋白主要胞质表达，阳性呈褐黄色或褐色。与对照组相比，ONFH组Wnt-11蛋白阳性率升高（P<0.05）（图2d）。

上调miR-410和下调Wnt-11升高大鼠BMD和BV/TV

微CT显示：正常组股骨头外观圆整、颈部粗细均匀、骨小梁结构连续均匀分布。ONFH组、agomir-NC组、siRNA-NC组、agomir-miR-410+OE-Wnt-11组大鼠股骨头逐渐塌陷、出现骨吸收区、股骨颈变细、骨小梁断裂连续性破坏。agomir-miR-410组、Wnt-11-siRNA组、agomir-miR-410+OE-NC组大鼠外观完整、无塌陷、无明显骨吸收区、骨小梁排列正常、结构完整（图3a）。

骨形态学结果：与正常组相比，ONFH组BMD和BV/TV降低（均P<0.05）。与agomir-NC组和siRNA-NC组相比，agomir-miR-410组和Wnt-11-siRNA组BMD和BV/TV升高（均P<0.05）。与agomir-miR-410+OE-NC组相比，agomir-miR-410+OE-Wnt-11组BMD和BV/TV下降（均P<0.05）（图3b,c）。

miR-410过表达和Wnt-11低表达升高股骨干、股骨头、脊柱BMD及血清钙磷水平

X线观察：正常组股骨头圆整、密度均匀、结构完整。ONFH组、agomir-NC组、siRNA-NC组、agomir-miR-410+OE-Wnt-11组大鼠股骨头变薄、出现骨吸收区。agomir-miR-410组、Wnt-11-siRNA组、agomir-miR-410+OE-NC组大鼠股骨头外观均匀、厚度完整（图4a）。

BMD和血清钙磷测定：与正常组相比，ONFH组股骨干、股骨头、脊柱BMD及血清钙磷水平降低（均P<0.05）。与agomir-NC组和siRNA-NC组相比，agomir-miR-410组和Wnt-11-siRNA组上述指标升高（均P<0.05）。与agomir-miR-410+OE-NC组相比，agomir-miR-410+OE-Wnt-11组上述指标降低（均P<0.05）（图4b,c）。

沉默Wnt-11和上调miR-410改善大鼠组织病理并抑制成骨细胞凋亡

HE染色：正常组骨小梁整齐清晰、排列规则紧密、骨细胞填满骨腔、钙化带与软骨下骨小梁连接良好。ONFH组、agomir-NC组、siRNA-NC组、agomir-miR-410+OE-Wnt-11组骨小梁稀疏、变细甚至断裂、结构紊乱、有碎片。部分骨腔内成骨细胞坏死、大量空骨腔、坏死骨小梁间肉芽组织明显增生包裹坏死小梁。agomir-miR-410组、Wnt-11-siRNA组、agomir-miR-410+OE-NC组外观完整、无明显骨吸收区、骨小梁排列正常、结构完整（图5a）。

电镜超微结构：正常组成骨细胞形态与骨腔吻合、细胞与腔壁间隙小、细胞器丰富、细胞核卵圆形、核膜完整、染色质未凝聚、胞质伪足伸向骨小管连接相邻细胞。成骨细胞位于骨小梁表面、细长、细胞器多。ONFH组、agomir-NC组、siRNA-NC组、agomir-miR-410+OE-Wnt-11组成骨细胞胞质大量脂质沉积、囊膜与腔壁间隙增宽、核膜与胞质间水肿亮带、核边缘化压迫、核膜完整、线粒体肿胀、内质网和高尔基体消失。agomir-miR-410组、Wnt-11-siRNA组、agomir-miR-410+OE-NC组大鼠成骨细胞形态正常、少数细胞核染色质聚集、胞质无明显脂滴、核膜完整（图5b）。

TUNEL染色：与正常组相比，ONFH组成骨细胞凋亡率升高（P<0.05）。与agomir-NC组和siRNA-NC组相比，agomir-miR-410组和Wnt-11-siRNA组凋亡率降低（均P<0.05）。与agomir-miR-410+OE-NC组相比，agomir-miR-410+OE-Wnt-11组凋亡率升高（P<0.05）（图5c,d）。

Western blot和RT-qPCR：与正常组相比，ONFH组Bcl-2下调、Bax上调（均P<0.05）。与agomir-NC组和siRNA-NC组相比，agomir-miR-410组和Wnt-11-siRNA组Bcl-2上调、Bax下调（均P<0.05）。与agomir-miR-410+OE-NC组相比，agomir-miR-410+OE-Wnt-11组Bcl-2下调、Bax上调（均P<0.05）（图5e-g）。

miR-410高表达和Wnt-11低表达增加成骨细胞数减少破骨细胞数

TRAP染色：正常组TRAP阳性破骨细胞形态不一，多为梭形或纺锤形，少数大破骨细胞多角形，多聚集于骨小脑周围。ONFH组、agomir-NC组、siRNA-NC组、agomir-miR-410+OE-Wnt-11组TRAP阳性细胞增多，形态多样呈大型多角形和多核，邻近骨小梁见骨吸收，形成典型吸收腔。agomir-miR-410组、Wnt-11-siRNA组、agomir-miR-410+OE-NC组TRAP阳性细胞减少，细胞呈长条形、形态规则，多核多角形破骨细胞罕见，邻近骨小梁结构相对完整（图6a）。

ALP染色：正常组ALP阳性成骨细胞形态细小圆形，聚集分布，多位于骨髓腔骨小梁间隙和部分骨小梁表面。ONFH组、agomir-NC组、siRNA-NC组、agomir-miR-410+OE-Wnt-11组ALP阳性成骨细胞分散分布于骨髓腔小梁间隙。agomir-miR-410组、Wnt-11-siRNA组、agomir-miR-410+OE-NC组成骨细胞阳性细胞增多，分布于骨髓腔小梁间隙和部分骨小梁表面（图6c）。

与正常组相比，ONFH组单位面积成骨细胞数减少、破骨细胞数增多（均P<0.05）。与agomir-NC组和siRNA-NC组相比，agomir-miR-410组和Wnt-11-siRNA组成骨细胞数增多、破骨细胞数减少（均P<0.05）。与agomir-miR-410+OE-NC组相比，agomir-miR-410+OE-Wnt-11组成骨细胞数减少、破骨细胞数增多（均P<0.05）（图6b,d）。

miR-410高表达和Wnt-11低表达上调OCN、ALP、BGLAP、Collα1，下调NTX-1、CTX-1、ACP5、CTSK、MMP9

ELISA结果：与正常组相比，ONFH组成骨功能指标ALP、OCN降低，破骨功能指标NTX-1、CTX-1升高（均P<0.05）。与agomir-NC组和siRNA-NC组相比，agomir-miR-410组和Wnt-11-siRNA组ALP、OCN升高，NTX-1、CTX-1降低（均P<0.05）。与agomir-miR-410+OE-NC组相比，agomir-miR-410+OE-Wnt-11组ALP、OCN下降，NTX-1、CTX-1升高（均P<0.05）（图7a）。

Western blot和RT-qPCR：与正常组相比，ONFH组成骨相关因子ALP、BGLAP、Collα1下调，破骨相关因子ACP5、CTSK、MMP9上调（均P<0.05）。与agomir-NC组和siRNA-NC组相比，agomir-miR-410组和Wnt-11-siRNA组ALP、BGLAP、Collα1上调，ACP5、CTSK、MMP9下调（均P<0.05）。与agomir-miR-410+OE-NC组相比，agomir-miR-410+OE-Wnt-11组ALP、BGLAP、Collα1下调，ACP5、CTSK、MMP9上调（均P<0.05）（图7b-d）。

ONFH大鼠组织中Wnt-11上调miR-410下调，Wnt-11为miR-410靶基因

在线软件分析miR-410与Wnt-11 3'UTR靶向关系：Wnt-11基因序列与miR-410序列存在特异性结合区域，提示Wnt-11为miR-410靶基因（图8a）。荧光素酶活性实验验证（图8b）：与NC组相比，miR-410 mimics组荧光素酶活性降低（P<0.05），MUT 3'UTR组无显著差异（P>0.05），证实miR-410特异性结合Wnt-11。

Western blot和RT-qPCR：与正常组相比，ONFH组miR-410下降、Wnt-11上升（均P<0.05）。与agomir-NC组相比，agomir-miR-410组miR-410升高、Wnt-11降低（均P<0.05）。与siRNA-NC组相比，Wnt-11-siRNA组Wnt-11下降（P<0.05）。与agomir-miR-410+OE-NC组相比，agomir-miR-410+OE-Wnt-11组Wnt-11升高（P<0.05）（图8c-e）。

免疫组化验证Wnt-11表达：Wnt-11蛋白主要胞质表达，阳性呈褐黄色或褐色。与正常组相比，ONFH组Wnt-11蛋白阳性率升高（P<0.05）。与agomir-NC组和siRNA-NC组相比，agomir-miR-410组和Wnt-11-siRNA组Wnt-11蛋白阳性率降低（均P<0.05）。与agomir-miR-410+OE-NC组相比，agomir-miR-410+OE-Wnt-11组Wnt-11蛋白阳性率升高（P<0.05）（图8f,g）。

讨论

ONFH是一种由血供失败、凝血纤溶系统紊乱导致股骨头塌陷的骨破坏性疾病。既往研究探讨激素诱导ONFH小鼠骨髓间充质干细胞miRNA表达谱，也有研究证实类固醇诱导ONFH中骨髓源性间充质干细胞成骨相关miRNA表达谱。Li-nHA/GM/rhEPO支架可上调Wnt和HIF-1/VEGF通路促进成骨血管生成，有利于糖皮质激素诱导ONFH修复。基于此，本研究探讨miR-410靶向Wnt-11预防ONFH的效应。

本研究提供实质性证据：ONFH组织中miR-410、ALP、BGLAP、Collα1下调，Wnt-11、ACP5、CTSK、MMP9上调。既往研究显示miR-410在骨肉瘤中下调并显示抗肿瘤作用；miR-410在乳腺癌雌激素受体阳性组织中下调。Wnt-11在多种癌症（如结直肠癌）中上调，促进癌细胞迁移侵袭；Wnt-11在激素非依赖性前列腺癌中升高。ALP是疾病诊断预后有用指标；OCN（BGLAP）是骨基质矿化相关高度保守分子。ACP5对破骨细胞分化和骨吸收必需，通过调节粘着激酶磷酸化促进细胞运动。CTSK是降解骨桥蛋白、I型胶原及其他骨基质蛋白的关键蛋白酶。MMPs可降解修饰细胞外基质和基底膜大多数成分，对癌症侵袭转移影响巨大。本研究还证实Wnt-11为miR-410靶基因。Zhang等人发现miR-410靶向Wnt3a 3'-UTR推断结合位点调节Wnt信号通路。

此外，上调miR-410和下调Wnt-11增加ONFH大鼠BMD和BV/TV。既往研究提示非创伤性ONFH患者脊柱BMD降低、尿DPD/Cr比升高；ONFH组股骨头和腰椎BMD低于对照组。影像学分析显示麝香素可恢复坏死股骨头BMD和BV/TV比，组织学进一步证实其对酒精诱导ONFH的保护作用。本数据显示高表达miR-410和低表达Wnt-11抑制成骨细胞凋亡。研究表明沉默miR-410可诱导氧化低密度脂蛋白诱导的人脐静脉内皮细胞增殖并减少凋亡；下调miR-410和上调SOCS3可降低抗凋亡因子Bcl-2、促进细胞凋亡。雄激素缺乏LNCaP细胞中下调Wnt-11可阻止神经内分泌样分化并导致前列腺癌细胞凋亡。本研究还显示下调Wnt-11和上调miR-410增强ALP、BGLAP、Collα1表达，减少ACP5、CTSK、MMP9表达。Wnt-11在宫颈癌细胞中升高可能通过激活Wnt/JNK通路磷酸化JNK-1促进肿瘤细胞增殖迁移侵袭；Wnt-11基因沉默可降低结直肠癌细胞系侵袭能力。miR-410过表达可通过直接靶向TRIM44抑制骨肉瘤细胞侵袭、迁移、增殖和上皮间质转化。既往研究称上调miR-410通过诱导凋亡在异种移植小鼠模型中抑制胆管癌生长。

结论

综上，本研究揭示ONFH中miR-410低表达、Wnt-11高表达，上调miR-410或下调Wnt-11可增加成骨细胞、减少破骨细胞以缓解ONFH。但需进一步开展临床研究检测miR-410和Wnt-11治疗ONFH的疗效。

数据与材料可用性

不适用

变更历史

缩写

ALP:

碱性磷酸酶

ANOVA:

方差分析

BMD:

骨矿物质密度

EDTA:

乙二胺四乙酸

ELISA:

酶联免疫吸附测定

GAPDH:

甘油醛-3-磷酸脱氢酶

GE:

通用电气

HE:

苏木精-伊红

LSD-t:

最小显著差异t检验

miR-410:

微小RNA-410

miRNAs:

微小RNA

NC:

阴性对照

OD:

光密度

ONFH:

股骨头坏死

PBS:

磷酸盐缓冲液

ROI:

感兴趣区域

RT-qPCR:

逆转录定量聚合酶链式反应

SD:

Sprague-Dawley

SDS:

十二烷基硫酸钠

THR:

全髋关节置换术

TRAP:

酒石酸抵抗性酸性磷酸酶

TUNEL:

末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP-生物素缺口末端标记