载有 miR495 和多柔比星的癌细胞膜装饰二氧化硅纳米粒子克服耐药性，有效治疗肺癌

介绍

最近的研究为多药耐药 (MDR) 与化疗失败之间的正相关性提供了越来越多的证据 [1, 2]。 MDR 最广为人知的机制之一是 ATP 结合盒 (ABC) 转运蛋白，其中 P-糖蛋白 (P-gp) 是研究最多的一种 [1, 3]。发现 P-gp 可以有效地将细胞内化疗药物泵出细胞，导致细胞内药物积累减少，从而导致疗效降低 [4, 5]。 P-gp的抑制对克服MDR显示出有益的作用，这可能是对抗MDR的潜在靶点。

MicroRNA (miRNA) 是一种天然存在的非编码 RNA。然而，miRNA在细胞转染和蛋白质表达的调节中显示出重要作用[6]。因此，据报道，P-gp 的表达受各种 miRNA 的影响，这取决于肿瘤类型 [7]。先前的研究表明，miR495 可以有效下调 MDR 卵巢癌细胞和胃癌细胞中 P-gp 的表达 [8]。本研究利用miR495进一步探讨其在MDR肺癌细胞P-gp调控中的作用。

由于具有无可比拟的优势，例如大大减少副作用和增加生物利用度，药物递送系统 (DDS) 在过去几十年中不断发展，并被认为是药物递送中游离药物的替代品，尤其是在癌症治疗中 [9,10 ,11,12]。因此，开发能够克服癌症治疗复杂的细胞外和细胞内障碍，同时适合多种药物负载的多功能DDS正成为研究热点[13,14,15,16]。二氧化硅（SLI）纳米粒子作为应用最广泛的候选物之一，具有制备容易、载药量高、生物相容性好等多种优点，是优选的纳米载体。自然，SLI 已被许多 DDS 用作纳米载体，以达到令人满意的功效 [17, 18]。

然而，临床前研究表明，DDS 的靶向递送对于成功的癌症治疗也至关重要。为了达到更好的靶向效果，最常用的方法是修饰DDS表面的靶向配体，使其能够与癌细胞表面的相应受体结合[16,19,20]。从小分子（分子量低于 1000 Da）到单克隆抗体（分子量超过 10 kDa），据报道这些靶向配体已成功应用于 DDS [21,22,23]。然而，由于某些配体的外源性或其他原因，发生了免疫反应和细胞毒性等不良反应。近年来，细胞质膜正在成为另一种有前途的材料，不仅可以修饰纳米粒子的表面，还可以作为生物相容性靶向成分。基于同源癌细胞膜（CCM）与癌细胞之间的相互作用，CCM已被证明可以大大提高DDS的肿瘤归巢能力[24, 25]。

为了在一个 DDS 中结合 CCM 和 P-gp 靶向 miR495 的肿瘤归巢特性，用于肺癌的鸡尾酒疗法（在我们的研究中被选为模型癌症），首先制造了带正电荷的胺 SLI 并预加载了多柔比星（DOX ）。随后加载 DOX 的胺 SLI 加载 miR495 以形成共递送核心 (SLI/R-D)。最后，SLI/R-D 用带负电荷的 CCM（从 A549/DOX 细胞获得）装饰，以制备共同递送和肿瘤靶向 DDS（CCM/SLI/R-D）。预计CCM可以特异性地将CCM/SLI/R-D引导至同质的A549/DOX细胞以增强其肿瘤靶向作用并增加细胞内摄取。同时，释放的miR495可以克服A549/DOX的MDR，与DOX实现协同抗癌作用。

材料和方法

材料

甲基噻唑基四唑 (MTT)，N -(2-氨基乙基)-3-氨基丙基三甲氧基硅烷 (AEAPS)、原硅酸四乙酯 (TEOS)、多柔比星 (DOX) 和 Triton X-100 购自 Sigma-Aldrich（美国密苏里州圣路易斯）。 miR495 由 Cell Biolabs Inc. (San Diego, CA, USA) 提供。其他化学品和试剂购自阿拉丁有限公司（中国上海），分析纯。

细胞培养和动物模型

A549（人肺癌）、A549/DOX（DOX 抗性细胞系）和 NIH3T3（小鼠胚胎成纤维细胞）细胞系在补充有 10% (v/v) 胎牛血清 (FBS)、青霉素 (100 U/mL) 和链霉素 (100 U/mL) 在 37 °C 的恒温培养箱中含有 5% CO2。 A549/DOX（DOX 抗性细胞系）是通过培养 A549 细胞与逐渐增加的 DOX 浓度建立的 [26]。所有细胞系均按照先前报道的标准方案进行培养 [27]。雄性 Balb/c 裸鼠（~ 20 g）来自武汉大学（中国武汉）模型动物研究所，并按照标准方案饲养。 A549/DOX 肿瘤异种移植模型是在前一篇文章的基础上建立的[28]。所有动物相关实验均经中山大学附属第三医院伦理委员会批准。

多细胞肿瘤球体模型

多细胞肿瘤球体 (MCTS) 是根据之前的报告建立的 [29]。简而言之，用高压灭菌的琼脂糖溶液覆盖 96 孔板（康宁，美国）以形成凝胶垫。然后，将混合的 A549/DOX 和 NIH3T3 细胞 (1:1) 接种到板中并孵育以形成 MCTS。用光学显微镜（CX 23，Olympus，Japan）监测MCTS的形成。

准备CCM/SLI/R-D

基于之前的报道[30]，胺SLI 的制备是在油包水微乳液中进行的。简而言之，在室温下制备了一种含有DOX 的油包水微乳液。然后依次加入AEAPS、TEOS和NH4OH引发反应。反应24 h后，用过量乙醇沉淀载有DOX的胺SLI，离心收集（3000 rpm，10 min）。

将miR495溶解在HEPES缓冲液中，以不同的重量/重量（w/w）比旋涡滴加到负载DOX的胺SLI水溶液中，得到SLI/R-D二元复合物[31]。

从 A549/DOX 细胞中分离 CCM 是根据先前的报告进行的 [32]。总之，使用离心收集和浓缩 A549/DOX 细胞。然后，将细胞分散在提取缓冲液中并进一步离心（10,000g , 10 min)，然后进行第二次超速离心 (100,000g , 60 min) 最终得到 CCM。所有程序均在 4 °C 下进行。使用BCA试剂盒（Beyotime，上海，中国）定量CCM的蛋白质浓度。

CCM 在 SLI/R-D 上的涂层使用与 miR495 结合类似的方案。总之，在涡旋下将不同体积的 CCM 溶液加入 SLI/R-D (1 mg/mL)。最后，混合物用探针型超声处理（100 W，5 分钟），然后离心（10,000g , 10 min) 得到 CCM/SLI/R-D。

特征化

CCM/SLI/R-D 的尺寸分布和 zeta 电位由 Zetasizer（ZS90，Malvern，UK）评估。此外，采用透射电子显微镜（TEM，JEM1230，JEOL，Japan）观察纳米载体的形貌。

SLI 与 miR495 的结合能力通过凝胶阻滞试验以裸 miR495 作为对照进行研究。以各种 w/w 比例（0.2-25，SLI 到 miR495）配制的 SLI/RD 加载到含有 Goldview（北京阳光生物科技有限公司）的 2% 琼脂糖凝胶上，并在 0.5×Tris-Borate 中电泳-EDTA 缓冲液（90 V，60 分钟）。 miR495的可视化使用Gel-Pro分析仪（Genegenius，Syngene，UK）进行。

裂解缓冲液（Beyotime，上海）用于从 CCM 中提取总蛋白，然后使用 BCA 试剂盒进行浓度定量。然后，将样品转移到聚（偏二氟乙烯）（PVDF）膜上。最后，膜用相应的第一抗体（Abcam，美国）和第二抗体（Abcam，美国）染色。密度计（E-Gel Imager，Thermo-Fisher，USA）用于可视化。

CCM/SLI/R-D 的载药量 (DLC) 通过将制备的纳米载体在甲醇中出现 48 h 来确定。将样品离心（10,000 rpm，30 min），收集上清液用于高效液相色谱（HPLC）测定DOX[33]。 miR495 载量通过 260 nm 处的紫外吸光度测定（UV5Nano，METTLER TOLEDO，Switzerland）。

在48 h内的每个时间点记录PBS和小鼠血浆中CCM/SLI/R-D的粒径变化。 CCM/SLI/R-D 中 DOX 的释放曲线根据之前的报道进行了研究[34]。

细胞内转染

A549/DOX 细胞在 6 孔板中接种 24 h，然后与 CCM/SLI/miR495（miR495 浓度，1-25 ng/mL）一起培养 48 h。之后，将细胞分离、收获并进行P-gp表达的蛋白质印迹分析。

根据先前的报告[23]确定细胞内药物浓度。简而言之，在用 CCM/SLI/miR495 处理不同的时间间隔后，A549/DOX 细胞与 DOX 一起孵育。在预定的时间间隔（4和8 h），将细胞分离，收集并分散在5 mL的DOX提取液（乙醇0.6 M HCl，1:1，v/v）中，然后在冰浴中以400 W超声处理40 次。将混合物在 4 °C 下放置 24 小时，然后以 12,000 rpm（4 °C）离心 10 分钟。收集上清液并进行如上所述的 DOX 含量测量。

细胞活力

无药物纳米载体（10-200 μg/mL）和CCM/SLI/RD（DOX浓度，2-50 μM；miR495浓度，10-250 nM；DOX和miR495的摩尔比固定在通过 3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑鎓溴化物 (MTT) 测定法测定 A549/DOX 细胞 200) 48 小时。免疫印迹法检测细胞凋亡相关蛋白的水平变化。

将直径为 300-400 μm 的 MCTS 与含有不同制剂（DOX 浓度，25 μM）的培养基在 37 °C 下培养 5 天。用光学显微镜记录MCTS的直径变化。

CCM/SLI/R-D 的体外和体内靶向

采用 FAM 标记的 siRNA 构建 DDS。 A549/DOX 细胞接种在 6 孔板中 24 h。然后，将细胞与过量的CCM孵育2 小时，并加入SLC/siRNA和CCM/SLC/siRNA。在设定的时间间隔收集细胞并通过流式细胞仪（FCM，FC500MCL，Beckman Coulter）进行定量。

采用Cy5标记的miR495构建DDS。携带 A549/DOX 肿瘤的小鼠被静脉注射。注射 SLI/miR495 和 CCM/SLI/miR495，并使用实时成像系统（ZEWTON 7.0，Vilber，法国）在预定时间间隔监测 miR495 的分布。给药12 h后，取处死小鼠的肿瘤和主要器官，并使用相同的系统成像进行分析分析。

体内抗癌试验

使用 A549/DOX 荷瘤小鼠评估 CCM/SLI/R-D 的体内抗癌试验。具体来说，将小鼠随机分为 5 组（n =6）：（1）盐水（作为对照），（2）游离 DOX，（3）CCM/SLI/DOX，（4）CCM/SLI/miR495，和（5）CCM/SLI/R-D。之后，小鼠在14 天内以5 mg/kg DOX和0.25 mg/kg miR495的剂量瘤内给药该制剂7次。每2 天测定一次各组小鼠的肿瘤体积和体重。

结果与讨论

准备CCM/SLI/R-D

为了在一种 DDS 中实现良好的载药能力和生物相容性，TEOS 和 AEAPS 在油包水微乳液中的同步水解用于制备 SLI。在制造过程中，DOX 被预先嵌入到 SLI 的基质中。如图 1a 所示，动态光散射 (DLS) 结果表明负载 DOX 的胺 SLI 的直径为 ~ 100 nm。 TEM图像进一步显示纳米颗粒呈球形，分布较窄，与DLS得到的结果一致。

一 SLI/R-D 在不同 w/w 比率下的尺寸和 zeta 电位变化。 b 不同 w/w 比率的 SLI/R-D 二元复合物的 miRNA 结合测定。数据显示为平均值 ± SD (n =3)

负载DOX的胺SLI的表面电位为26.83 mV，有利于作为miR495的载体。根据之前的报告 [31]，miR495 和 SLI 组装形成二元复合物是由静电相互作用驱动的。二元复合物中与 miR495 的 w/w SLI 对最终转染效率产生显着影响。如图 1a 所示，由于 miR495 是带负电荷的大分子，在 SLI 与 miR495 的低 w/w 比率下，二元复合物显示出负表面电荷，颗粒尺寸显着增加，这可能是由于相邻纳米颗粒的粘附。然而，随着 w/w 比的增加，二元配合物的表面电荷逐渐变为正电荷，在 100 nm 附近观察到稳定的粒径。结果表明，当w/w比达到20时，二元配合物的粒径和表面电位均保持稳定，随着w/w比的增加没有明显变化。

纳米载体对 miR495 的结合和保护能力对于基因传递至关重要。通过凝胶阻滞测定评估 SLI 的 miR495 结合能力。如图 1b 所示，裸 miR495 没有表现出延迟，而 SLI 的加入显着改变了 miR495 的行为。观察到SLI显示出随着w/w比的增加而增加的miR495结合能力，在w/w比为5时实现miR495的完全阻滞。

综上所述，推断具有适当粒径和理想表面电荷以及有效的 miR495 结合和保护性能的 w/w 比为 20 的二元复合物是最佳配方，被选为模型执行以下实验。

然后，我们通过以不同质量比（SLI 与 CCM 蛋白质，w/w）混合 CCM 与二元复合物来探索最佳 CCM 蛋白质与二元复合物的比例。最佳比例由不同条件下得到的粒径和表面电荷决定。如图 2a 所示，CCM（负电荷）的加入导致产品尺寸出现显着波动，但表面电荷持续减少。结果表明，CCM成功地锚定在二元复合物的表面。最重要的是，观察到 CCM/SLI/R-D 的颗粒尺寸和表面电荷在质量比为 7.5 时达到稳定状态，并且额外的 CCM 对表面电荷的影响不显着，尺寸仅略有增加。具体而言，纳米颗粒的直径达到121.28 ± 3.36 nm，zeta电位变为- 28.04 ± 2.64 mV，与游离CCM的表面电荷相似（- 27.95 ± 3mV），表明CCM的表面电荷为- 27.95 ± 3mV。在这种情况下达到饱和。因此，选择质量比为7.5的CCM/SLI/R-D作为模型配方进行以下实验。

一 CCM SLC/R-D 在不同 w/w 比率下的尺寸和 zeta 电位变化。插入的图像是 CCM 和 CCM/SLI/R-D 中三种代表性蛋白质的西方螺栓分析。 b CCM/SLI/R-D 的尺寸分布和 TEM。数据显示为平均值 ± SD (n =3)。比例尺 100 nm

CCM/SLI/R-D 的表征

先前的报告表明，CCM 中的蛋白质在用于修饰纳米粒子时能够归巢同源肿瘤细胞 [35, 36]。因此，选择了三种膜蛋白（Na-K​​ ATPase、AT1R 和 CXCR4）并将它们在 CCM 中的表达水平与 CCM/SLI/R-D 进行比较。如图 2a 的插入图像所示，CCM 中所有 3 种蛋白质的含量都显示出与 CCM/SLI/RD 相似的强度，这表明 CCM 中的整合蛋白在包被后遗传给了 CCM/SLI/RD，并且在此过程中，损失或退化可以忽略不计。该结果也为CCM/SLI/R-D的成功构建提供了确凿的证据，有利于增加CCM/SLI/R-D的肿瘤归巢。

还使用 DLS 和 TEM 研究了 CCM/SLI/R-D 的尺寸分布和形态。如图 2b 所示，DLS 显示 CCM/SLI/RD 狭窄地分布在 120 nm 附近，而 TEM 显示 CCM/SLI/RD 的特征是球形核壳结构，在表面可以清楚地观察到脂质双层层。

CM/SLI/R-D中DOX的DLC（HPLC测定）可达17.96%，miR495负载量（UV分光光度计测定）可达1.64%。

先前的研究已经得出了安全递送药物分子的几个初步要求。首先，所采用的 DDS 应在生理环境下保持稳定而不会发生剧烈的尺寸变化，因为粒径对系统的体内命运至关重要 [10, 37]。因此，研究了 CCM/SLI/R-D 的时间依赖性稳定性。为了确定CCM/SLI/R-D在生理环境中的胶体稳定性，记录了48 h内DDS在PBS（pH 7.4）和小鼠血浆中的大小变化。如图 3a 所示，CM/SLN/Ce6 可以在整个测试范围内有效地保持其尺寸而没有显着变化。因此，得出结论，CCM/SLI/R-D 能够在生理条件下保持稳定。如图 3b 所示，CCM/SLI/RD 可以在细胞外条件下保持稳定性（32.76% 的药物在孵育 120 h 后释放），表明在递送过程中，CCM/SLI/RD 可以安全地封装加载药物分子而不会引起潜在的不良反应。最重要的是，进入细胞并处于癌细胞的酸性环境中，药物很容易释放（75.93%），这可能归因于高氢浓度削弱了药物与载体的结合[6, 38]。

一 LCC/R-A 在 PBS (pH 7.4) 和小鼠血浆中的胶体稳定性在 37 °C 下可保持长达 48 小时。 b 在细胞外和细胞内 pH 值（7.4 和 5.5）条件下，释放介质中 DOX 从 LCC/R-A 的药物释放曲线。数据显示为平均值 ± SD (n =3)

细胞内转染

为了揭示miR495转染与P-gp表达的关系，用不同浓度的miR495转染A549/DOX细胞。之后，使用蛋白质印迹法测定这些细胞中的 P-gp 表达水平。如图 4a 所示，P-gp 的表达与 miR495 浓度呈负相关，表明 CCM/SLI 可用作 miR495 递送的有用工具，这有利于 CCM/SLI/RD 逆转A549/DOX 细胞中的 MDR。作为概念证明，进一步研究了 miR495 转染对细胞内 DOX 积累变化的影响。在用 CCM/SLC/siRNA 处理 48 或 72 h 后（图 4b），A549/DOX 细胞用 DOX 处理不同的时间间隔。如图5d所示，CCM/SLC/siRNA预处理48 h后，A549/DOX细胞中DOX的细胞荧光分别增加了1.49倍（4 h后孵育）和1.47倍（8 h后孵育） ， 分别。 CCM/SLC/siRNA预处理72 h后，A549/DOX细胞的细胞内DOX荧光分别增加1.63倍（4 h后孵育）和1.85倍（8 h后孵育）。结果表明，与未经处理的细胞相比，CCM/SLC/siRNA可以通过增加细胞内DOX的积累来克服A549/DOX中的MDR。

一 CCM/SLI/miR495处理48 h后A549/DOX细胞miR495浓度与P-gp蛋白表达的关系。 b 用LCC/miR495处理不同时间间隔后A549/DOX细胞内DOX的积累。数据显示为平均值 ± SD (n =3)

无药物载体处理的 A549/DOX 细胞的存活率 (a ) 或含有药物 (b ) 不同的纳米颗粒/药物浓度的不同制剂 48 h。 c 不同处理后 caspase-3、细胞色素 C 和 bcl-2 蛋白表达的蛋白质印迹分析。数据显示为平均值 ± SD (n =3)。 ^** P <0.01

体外抗癌试验

研究了无药物载体 (CCM/SLI) 的细胞毒性，以进一步揭示 DDS 的生物相容性。如图 5a 所示，在最高浓度 200 μg/mL 下与 CCM/SLI 孵育 48 h 后，A549/DOX 仍显示超过 90% 的活力，这表明 CCM/SLI 具有生物相容性，毒性不明显。到细胞。

之后，评估了体外抗癌试验。如图 5b 所示，所有制剂的抗癌作用均与药物浓度呈正相关。具体而言，在最高 DOX 浓度（50 μM）下，A549/DOX 细胞的存活率仍为 72.6%。 CCM/SLI/DOX和CCM/SLI/miR495在相同条件下获得相似的细胞活力，分别为59.4%和63.3%，高于DOX。然而，注意到 CCM/SLI/R-D 处理的细胞活力显着降低至 38.5%。此外，CCM/SLI/R-D中的CI指数为0.84，表明miR495和DOX对A549/DOX细胞有很强的协同杀伤作用。

为了再次验证结论，对不同配方中常用的凋亡调控蛋白（caspase-3、bcl-2和细胞色素-3）进行了评估。如图 5c 所示，CCM/SLI/RD 处理的细胞中 cleaved caspase-3 的量最高，bcl-2（凋亡抑制因子）水平在所有测试组中最低，这进一步证实了优选的抗癌药物CCM/SLI/RD 的疗效。此外，CCM/SLI/R-D组细胞色素3表达明显升高，提示该组细胞凋亡与线粒体损伤有关。

采用 MCTS 来模拟实体瘤并评估不同制剂的抗癌作用。如图 6a 所示，游离 DOX 组的 MCTS 体积在整个实验期间持续增长，表明 A549/DOX 中的 MDR 可以显着降低 DOX 的细胞毒性。单一递送系统（SLI/DOX 和 SLI/miR495）表现出一定的抑制作用，生长轻度下降。最重要的是，CCM/SLI/R-D 中 miR495 和 DOX 的组合显示出大大提高的功效，在测试结束时观察到负体积增长。图6b中的光学图像也得出了类似的结论。

音量变化 (a ) 和相应的光学图像 (b ) 不同处理后的 MCTS。数据显示为平均值 ± SD (n =3)。 ^** P <0.01

体外和体内靶向

为了揭示各种制剂差异化抗肿瘤作用的可能原因，评估细胞摄取以研究 CCM 修饰是否可以积极增加 A549/DOX 细胞中纳米颗粒的内化能力，因为许多研究表明 CCM 的表面修饰可以增强肿瘤- 纳米载体的靶向能力 [39, 40]。如图 7a 所示，CCM/SLI/miR49 和 SLI/miR495 组的细胞内荧光强度随时间增加，表明时间与两种纳米颗粒的细胞摄取呈正相关。此外，CCM/SLI/miR495组观察到更高的荧光信号，在6 h时间点是SLI/miR495组的1.58倍。为了验证 CCM/SLI/miR495 的摄取是否是通过 CCM 介导的内吞作用，在添加纳米载体之前将细胞与过量的 CCM 一起孵育。观察到CCM/SLI/miR495组的荧光强度持续降低，而SLI/miR495组的荧光强度几乎保持不变。这些结果表明CCM/SLI/miR495通过CCM相关的内吞作用被细胞摄取。

一 A549/DOX 细胞（用/不用 CCM 预处理）中不同制剂的细胞内时间依赖性摄取的定量分析。 b 在注射后 48 小时，用 SLI/R-A 和 CCM/SLI/R-A 处理的小鼠解剖肿瘤和主要器官的平均荧光强度。数据表示为平均值 ± SD (n =3)。 ^** P <0.01

来自 A549/DOX 的 CCM 有望增强 CCM/SLI/R-D 对同种 A549/DOX 细胞的肿瘤靶向能力，以增加纳米载体在肿瘤中的积累。为了验证我们的概念，SLI/R-D 和 CCM/SLI/R-D 的分布由实时成像系统监控。如图 7b 所示，正如预期的那样，与 SLI/R-D 相比，CCM/SLI/R-D 在肿瘤内显示出更多的积累。此外，SLI/R-D 分布于几乎所有器官（除心脏外），以肝、脾为重点，可能与其肿瘤归巢能力差有关。相反，CCM修饰可以显着减轻肝脏捕获，以帮助装载的货物增强归巢到肿瘤组织。

体内抗肿瘤功效

进行了 CCM/SLI/R-D 的体内抗肿瘤功效。用DOX或SLI/DOX处理后，小鼠的肿瘤生长减慢。而CCM/SLI/R-D抗肿瘤效果最好，肿瘤体积明显缩小303 ± 25 mm ³ .此外，不同组小鼠的体重变化结果也显示出有趣的结果（图8）。结果表明，CCM/SLI/R-D 治疗的小鼠体重没有明显下降，表明 CCM/SLI/R-D 的肿瘤靶向能力可以增强抗肿瘤效果，减少副作用。相比之下，游离 DOX 的非靶向分布对小鼠造成系统性毒性，表现为随着时间的推移体重逐渐下降。总之，CCM/SLI/R-D是一种用于肺肿瘤治疗的优越的肿瘤归巢DDS。

The tumor volume (a ) and body weight (b ) of tumor tissue analysis of A549/DOX tumor-bearing Balb/c nude mice after intratumoral administration of different formulations. Data were expressed as mean ± SD (n =6)。 ^** P <0.01

结论

In summary, we successfully constructed a CCM-coated SLI nanoparticle as a DDS to co-delivery miR495 and DOX (CCM/SLI/R-D). The characterization demonstrated that CCM/SLI/R-D showed well distribution with a diameter of 120 nm, which showed high stability as well as pH-responsive drug release. Cellular experiments revealed that CCM/SLI/R-D could realize preferable miR495 delivery which achieved the significant downregulation of P-gp, which finally overcome the MDR in A549/DOX by increasing the intracellular DOX accumulation compared to untreated cells. The CCM/SLI/R-D showed promising tumor-homing capability. Most importantly, the synergetic effect of miR495 and DOX achieved much more potent anticancer effect to mono-delivery DDS or free DOX both in vitro and in vivo.

数据和材料的可用性

The data and the analysis in the current work are available from the corresponding authors on reasonable request.

缩写

AEAPS:

N -(2-Aminoethyl)-3-aminopropyltrimethoxysilane

CCM:

Cancer cell membrane

DDS:

Drug delivery systems

DLC:

Drug loading content

DOX:

Doxorubicin

HPLC：

高效液相色谱

MCTS:

Multicellular tumor spheroid

MDR:

Multidrug resistance

miRNA:

MicroRNAs

MTT：

Methyl thiazolyl tetrazolium

P-gp:

P-glycoprotein

SLI:

二氧化硅

TEOS：

原硅酸四乙酯